Revvity، PSNAPAT2، بلازميد مستقبلات الأنجيوتنسين Tag-lite pSNAP-AT2، 10 ميكروغرام

ملخص
على مدى السنوات القليلة الماضية، مهدت تقنية SNAP-Tag، بالاشتراك مع تقنية TR-FRET، الطريق لتطوير العديد من فحوصات الارتباط غير المشعة والتي لا تتطلب غسلًا. تعتمد هذه الطريقة على نقل الجينات إلى الخلايا باستخدام بلازميدات تحمل ترميز SNAP-Tag، ثم وسمها بالتيربيوم. توفر شركة Cisbio مجموعة كبيرة من هذه البلازميدات. يتم استنساخ جميع جينات GPCR في ناقل تعبير يقع مباشرةً أسفل محفز CMV، وهي جاهزة للتعبير عن البروتين ووسمه.
جميع المعلومات الواردة في هذه الصفحة تتعلق بالبلازميد Tag-lite المستنسخ مع مستقبل الأنجيوتنسين AT2.
توفر فحوصات Tag-lite العديد من الميزات والتطبيقات مقارنةً بفحوصات ربط المستقبلات/الروابط التقليدية:

غير مشع
متجانس وخالٍ من الترشيح
مجموعات وكواشف جاهزة للاستخدام لإجراء فحوصات الارتباط
لا يُغير من خصائص مستقبلات الدواء
تكنولوجيا خضعت لمراجعة الأقران وتم التحقق من صحتها
دراسات حركية شاملة مع قيم Kd و Ki الحقيقية، وثوابت معدل الارتباط (Kon) والانفصال (Koff).
فحص وتوصيف المنتجات البيولوجية والجزيئات الكبيرة
كيف يعمل؟
الخطوة 1 - نقل البلازميد
استخدم تقنيات النقل الجيني القياسية (راجع بروتوكول النقل الجيني المؤقت) للتعبير المؤقت عن SNAP-GPCR المطلوب في خط الخلية الخاص بك.

الخطوة 2 - تحديد المستقبلات
SNAP-tag® عبارة عن علامة اندماج صغيرة تتفاعل تساهميًا مع ركائز محددة. تُمكّن هذه العلامة من وسم أي بروتين مرغوب فيه بشكل نوعي وتساهمي (راجع إجراءات الوسم). تُقدّم الخلايا غير موسومة، ويجب وسمها باستخدام Lumi4-Terbium قبل إجراء اختبار الارتباط. تتوفر كواشف الوسم في 4 أحجام عبوات مختلفة من كتالوج Revvity.

الخطوة 3 - فهم مبدأ التحليل
يُعدّ إجراء اختبار ارتباط المستقبلات باستخدام Tag-lite في غاية السهولة. ما عليك سوى وضع 10 ميكرولتر من الخلايا الموسومة في كل بئر، متبوعًا بـ 5 ميكرولتر من الليجاند الموسوم و5 ميكرولتر من المركب المراد اختباره. وكما هو الحال في جميع اختبارات HTRF، لا تتطلب اختبارات Tag-lite أي خطوات غسل. ستجد رسمًا توضيحيًا للإجراء المتبع على اليمين.

الخطوة 4- الارتباط التشبعي (KD)
يقيس اختبار تشبع الارتباط الارتباط الكلي وغير النوعي لتراكيز متزايدة من الليجاند في ظروف التوازن. ولإجراء الاختبار، يُعاير الليجاند الفلوري في محلول يحتوي على كمية محددة من الخلايا الموسومة، ثم يُحضن حتى الوصول إلى حالة التوازن. نسبة HTRF المُستخلصة من هذه المعايرة هي الارتباط الكلي.

الخطوة 5 - الارتباط التنافسي (KI)
يُجرى اختبار ارتباط تنافسي لقياس ثابت التفكك (Ki). ولإجراء هذا الاختبار، يُعاير المركب في محلول يحتوي على تركيز ثابت من الليجاند الفلوري وكمية ثابتة من الخلايا. تطبيق - ارتباط الليجاند بالمستقبل
براند-HTRF
طريقة الكشف - HTRF
مجموعة المنتجات - البلازميدات
شروط الشحن - يتم الشحن باستخدام الثلج الجاف
الفئة المستهدفة - مستقبلات البروتين المقترن بالبروتين ج
تقنية TR-FRET
حجم الوحدة - قارورة واحدة