شركة Thermo Fisher، 11635018، خلايا ElectroMAX™ Stbl4™ المؤهلة

خلايا ElectroMAX™ Stbl4™ المؤهلة: صُممت خلايا ElectroMAX Stbl4 المؤهلة خصيصًا لاستنساخ الإدخالات غير المستقرة. هذا السلالة مشتقة من خلايا Stbl2 (المُهندسة من سلالة JM109/J5). ولتحسين الأداء، أُدخلت طفرة gal، وأُعيدت lon إلى النمط البري مع الأليل lon+، وأُدخلت جزيء F′ الحلقي. تحتفظ سلالة Stbl4 بالخصائص الوراثية لسلالة Stbl2 للحفاظ على الإدخالات غير المستقرة مثل تسلسلات الفيروسات القهقرية، والتكرارات المباشرة، وجينات المصفوفة المترادفة. بالإضافة إلى ذلك، يُذكر أن سلالة Stbl4 تُستخدم في اكتشاف المستقلبات الثانوية المعقدة وبناء مكتبات CRISPR وصيانتها.
باعتبارها خلايا مؤهلة للتحويل الكهربائي، تستطيع خلايا Stbl4 تحقيق كفاءة تحويل عالية تزيد عن 5 × 10⁹ وحدة تشكيل مستعمرة/ميكروغرام، مما يجعلها مثالية للتطبيقات الصعبة مثل توليد الحمض النووي المكمل (cDNA) وتقنية كريسبر (CRISPR) ومكتبات الجينوم ذات الإدخالات غير المستقرة أو باستخدام كميات قليلة من الحمض النووي. كما تستطيع خلايا Stbl4 المؤهلة للتحويل الكهربائي استيعاب البلازميدات الكبيرة والحفاظ عليها (مثل البلازميدات الكبيرة).
(على سبيل المثال، الكوزميدات بحجم 50 كيلوبايت ومستنسخات P1 بحجم 100-200 كيلوبايت). تحتوي خلايا Stbl4 أيضًا على إبيسوم F'، مما يسمح لها بالعمل كمضيف للحمض النووي أحادي السلسلة مثل نواقل الاستنساخ M13mp إذا تم توفير طبقة من DH5αF′IQ للسماح بتكوين اللويحات. يوفر الواسم lacZΔM15 تكملة ألفا لجين بيتا-جالاكتوزيداز من pUC أو نواقل مماثلة، وبالتالي يمكن استخدامه للفحص الأزرق والأبيض للمستعمرات على أطباق أجار تحتوي على X-gal أو Bluo-gal وIPTG. تسمح طفرة themcrA وحذف themcrBC-hsdRMS-mrr باستنساخ التسلسلات الجينومية الميثيلية. أخيرًا، تزيد طفرة endA1 بشكل كبير من إنتاجية البلازميد وجودته.
ميزات الخلية الكفؤة ElectroMAX Stbl4
• توفير كفاءة تحويل تزيد عن 5 × 10⁹ وحدة تشكيل مستعمرة/ميكروغرام
• يعمل النمط الجيني الفريد على تثبيت التكرارات المباشرة وتسلسلات الفيروسات القهقرية
• يسمح كل من طفرة mcrA وحذف mcrBC-hsdRMS-mrr باستنساخ التسلسلات الجينومية الميثيلية.
• دعم الفحص الأزرق والأبيض للنسخ المستنسخة المؤتلفة بسبب tolacZΔM15
• مصمم لتقديم مستحضرات بلازميد عالية الإنتاجية للتطبيقات اللاحقة
• يسمح الإبيسوم F' المستقر بعزل الحمض النووي أحادي السلسلة (ssDNA). تكاثر الحمض النووي غير المستقر والكبير الحجم باستخدام خلايا ذات كفاءة تحويل عالية. تمتلك العديد من سلالات الخلايا المؤهلة النمط الجيني recA1، مما يقلل من إعادة التركيب. ومع ذلك، توجد بعض الحالات التي يكون فيها الحمض النووي الذي تحاول استنساخه غير مستقر في هذه الخلايا، ربما بسبب وجود تكرارات معكوسة أو مباشرة أو مناطق غنية بالـ GC. في حين أن هذه التسلسلات شائعة نسبيًا في جينومات حقيقيات النوى، إلا أنها نادرة في الإشريكية القولونية. وبالتالي، قد تحدث عمليات إعادة ترتيب عند إدخال هذه التسلسلات في سلالات الإشريكية القولونية القياسية.
النمط الجيني: mcrA Δ(mcrBC-hsdRMS-mrr)recA1endA1gyrA96gal–thi-1supE44 λ–relA1 Δ(lac-proAB) / F′ [proAB+lacIqZΔM15Tn10(TetR)] ابحث عن السلالة والشكل الذي يناسب احتياجاتك. تتوفر سلالات Stbl بخلفيات جينية متنوعة.
يتوفر سلالة Stbl3 بتنسيق MultiShot للتطبيقات ذات الإنتاجية العالية.
تتوفر خلايا DH5αF´IQ ذات الكفاءة القصوى بتنسيق مؤهل كيميائياً.
استكشف أنواع أوساط نمو البكتيريا (ملاحظات)
• لتحقيق أقصى قدر من استقرار التكرارات المباشرة والتسلسلات الفيروسية الرجعية، قم بحضانة خلايا Stbl4 وإجراء دراسات التعبير عند 30 درجة مئوية.
• يلزم جهاز تثقيب كهربائي عالي الجهد.
• تتوفر تسلسلات الجينوم لسلالة Stbl4 في قاعدة بيانات NCBI GenBank تحت أرقام الوصول CP076043.
1 و CP076044.
1 (أسد وآخرون 2021).
مقاومة البكتيريا للمضادات الحيوية: نعم (التتراسيكلين)
فحص اللون الأزرق/الأبيض: نعم (lacZΔM15)
استنساخ الحمض النووي الميثيلي: نعم (mcrB، mrr)
استنساخ الحمض النووي غير المستقر: نعم (recA1)
يحتوي على إبيسوم F: نعم
التوافق مع الإنتاجية العالية: منخفض
يحسن جودة البلازميد: نعم (endA1)
البلازميد: يمكن استخدامه للبلازميدات التي يزيد حجمها عن 100 كيلوبايت
تحضير الحمض النووي غير الميثيلي: لا
خط الإنتاج: ElectroMAX™
نوع المنتج: خلايا مؤهلة كهربائياً
الكمية: 5 × 100 ميكرولتر
يقلل من إعادة التركيب: نعم (recA1)
شروط الشحن: ثلج جاف
مقاومة العاثية T1 (tonA): لا
مستوى كفاءة التحويل: كفاءة عالية (>1 × 109 وحدة تشكيل مستعمرة/ميكروغرام)
التنسيق: أنبوب
النوع: الإشريكية القولونية (K12)
حجم الوحدة: كل وحدة