Thermo Fisher، 16117، طقم سحب واكتشاف رأس راس النشط

مجموعة سحب وكشف بروتين Ras النشط: تتيح مجموعة سحب وكشف بروتين Ras النشط من Thermo Scientific الإثراء والكشف الانتقائي لبروتين Ras GTPase المرتبط بـ GTP من خلال تفاعل بروتيني محدد مع نطاق ربط بروتين Raf1.
تتضمن مجموعة الكشف عن بروتين Ras النشط (Active Ras Pull-Down and Detection Kit) نطاق ربط Ras (RBD) المُنقّى من بروتين GST-Raf1، وراتنج الأغاروز المُرتبط بالغلوتاثيون، وعناصر تحكم موجبة وسالبة (GTPγS وGDP على التوالي)، ومحلول التحلل/الربط/الغسل، وجسم مضاد لبروتين Ras، ومحلول عينة SDS، وأعمدة الطرد المركزي، وأنابيب التجميع. وقد تم التحقق من صحة المجموعة باستخدام مستخلصات من خلايا NIH 3T3، وهي سلالة خلوية معروفة بنشاطها القوي لبروتين Ras.
ميزات مجموعة Active Ras Pull-Down and Detection Kit:
• حساسية ودقة عاليتان - تضمن الكواشف المُحسّنة، والأجسام المضادة النوعية لبروتين Ras، وإجراءات لطخة ويسترن، ضوابط دقيقة ونتائج شبه كمية.
• تم التحقق من صحتها - تم اختبارها وظيفيًا للكشف عن Ras لضمان الجودة والأداء
• متوافق - فعال مع مجموعة متنوعة من أنواع الخلايا من مصادر الفئران والجرذان والبشر. التطبيقات:
• تتبع تنشيط بروتين Ras GTPase أثناء تمايز الخلايا، وهجرتها، وانقسامها، وإعادة ترتيب الهيكل الخلوي
• دراسة دور بروتين Ras النشط في السرطان وتكوين الأوعية الدموية
• مراقبة نشاط راس بعد التحفيز بعوامل النمو
• فحص مثبطات الجزيئات الصغيرة لتأثيرها على نشاط بروتين Ras: تم التحقق من صحة مجموعة الكشف عن بروتين Ras النشط وطريقة إثراء بروتين Ras النشط باستخدام مستخلصات خلوية مُعالجة بـ GTPγS لتنشيط بروتين Ras الداخلي، ومقارنتها بمستخلصات مُعالجة بـ GDP لتعطيل هذا البروتين GTPase الصغير. يؤدي العلاج بـ GTPγS إلى احتجاز بروتين Ras في شكله النشط المرتبط بـ GTP، مما ينتج عنه إشارة قوية عند وجود بروتين Ras الداخلي. أما العلاج بـ GDP فيدفع بروتين Ras إلى الحالة غير النشطة المرتبطة بـ GDP، مما ينتج عنه إشارة ضعيفة أو معدومة، بغض النظر عن مستويات بروتين Ras. تم تحسين المجموعة للكشف باستخدام تقنية Western blot مع جسم مضاد ثانوي مُقترن بـ HRP (جسم مضاد IgG مضاد للفأر من الماعز، رقم القطعة 31430) وركيزة Thermo Scientific SuperSignal West Pico الكيميائية المتألقة (رقم القطعة 34080). تحتوي كل مجموعة على مكونات كافية لإجراء 30 اختبار سحب.
يمكن استخدام مكونات المجموعة أيضًا للتلوين المناعي الفلوري. تم تحفيز خلايا NS-1 العصبية باستخدام عامل نمو الأعصاب (NGF) لدراسة التوزيع المكاني لبروتين Ras النشط باستخدام بروتين GST-RBD والأجسام المضادة لبروتين Ras المرفقة في المجموعة.
خلفية عن بروتينات راس: تنتمي عائلة بروتينات راس الفائقة من بروتينات GTPases، والتي سُميت نسبةً إلى جين الورم الفيروسي ساركوما الفئران، إلى العديد من نظائر راس، بما في ذلك K-Ras وH-Ras وN-Ras. وبينما تُعبَّر هذه النظائر الثلاثة بمستويات مختلفة في أنواع الخلايا المختلفة، فإن الطفرات المنشطة لواحدة منها على الأقل موجودة في حوالي 15% من جميع أنواع السرطان. تعمل بروتينات راس كمحفزات لنقل الإشارات داخل الخلايا من الجزيئات خارج الخلوية، وترتبط بالغشاء البلازمي عبر تعديل الدهون وإضافة مجموعة برينيل إلى طرفها الكربوكسيلي. تحدد هذه التعديلات في الطرف الكربوكسيلي تموضع بروتين راس في نطاقات غشائية دقيقة متميزة، مما يُحدد مسار الإشارات اللاحقة. تؤثر مسارات إشارات راس على العديد من العمليات الخلوية، بما في ذلك التكاثر والبقاء والنقل الحويصلي والتعبير الجيني.
يُعدّ مسار الإشارات عبر بروتين Ras أساسيًا للعديد من الاستجابات الخلوية، ويتم تنظيم تنشيط Ras بواسطة العديد من بروتينات GEF وGAP. تعمل بروتينات GEF على تنشيط GTPase عن طريق فصل GDP عن Ras غير النشط، مما يسمح بارتباط Ras بـ GTP. في المقابل، تُعطّل بروتينات GAP بروتينات GTPase عن طريق تحلل GTP إلى GDP. يُساهم Ras في نقل الإشارات اللاحقة من خلال التفاعل مع البروتينات المؤثرة، بما في ذلك Raf وPI3 kinase. يُعدّ Raf1 كيناز بروتين سيرين/ثريونين، وهو جزء من مسار إشارات كيناز MAP الذي يؤدي إلى تنشيط ERK وp38، مما يؤثر على تكاثر الخلايا وبقائها. ينتج عن إشارات PI3 kinase تنشيط AKT وmTOR، وهما أساسيان لنمو الخلايا وبقائها. كما يُعدّ Ras ضروريًا لتكوين الخلايا وتطورها، بما في ذلك تطور الخلايا المناعية ووظائفها.
المزيد من بيانات المنتج
• قياس تنشيط البروتينات الصغيرة الرابطة لـ GTP عبر المؤثرات النهائية الخاصة بها
• الكشف عن بروتينات GTPases النشطة وتحديد موقعها في تمايز الخلايا العصبية: فحص قياس كمية البروتين
المقترن: HRP
الوصف: طقم بيرس النشط للسحب والكشف
للاستخدام مع (التطبيق): سحب لأسفل
محتويات المجموعة: محلول عازل لعينة SDS (2X)، 1.
٥ مل، أكواب دوارة، ٣٠ كوبًا، محلول التحلل/الربط/الغسل (١X)، ١٠٠ مل، GTPγS (١٠٠X)، ٥٠ ميكرولتر، بروتين اندماجي GST-Raf1-RBD، قارورة واحدة، راتنج أجاروز الغلوتاثيون، ٣ مل، GDP (١٠٠X)، ٥٠ ميكرولتر، جسم مضاد لـ Ras، ٥ وحدات، ٢٥٠ ميكرولتر، أنابيب تجميع، ٩٠ أنبوبًا
الكمية: 30 تفاعلاً
خصائص الركيزة: ركيزة قائمة على البروتين
نوع الركيزة: ركيزة GTPase
الهدف: الكينازات (متعددة)، فوسفودايسترازات، أدينوسين ثلاثي الفوسفات، جي تي فوسفاتازات، فوسفاتازات
طريقة الكشف: لطخة ويسترن، التلألؤ الكيميائي
مجموعة اختبار المناعة: عمود الدوران
نوع الملصق: بدون ملصق
حجم الوحدة: كل وحدة