Thermo Fisher، 16118، طقم سحب وسحب Active Rac1 من Thermo Scientific™

مجموعة سحب وكشف Rac1 النشط من Thermo Scientific™ هي مجموعة كاملة للإثراء الانتقائي والكشف عن Rac1 GTPase المرتبط بـ GTP من خلال تفاعل بروتيني محدد مع مجال ربط بروتين Pak1.
تتضمن مجموعة الكشف عن بروتين Rac1 النشط (Active Rac1 Pull-Down and Detection Kit) نطاق ربط البروتين GST-Pak1 النقي (PBD)، وراتنج الأغاروز الغلوتاثيون، وعناصر تحكم موجبة وسالبة (GTPγS وGDP على التوالي)، ومحلول التحلل/الربط/الغسل، والجسم المضاد الأولي لـ Rac1، ومحلول عينة SDS، وأعمدة الطرد المركزي، وأنابيب التجميع. وقد تم التحقق من صحة المجموعة باستخدام مستخلصات من خلايا NIH3T3، وهي سلالة خلوية معروفة بنشاط Rac1 القوي.
ميزات مجموعة Active Rac1 للسحب والكشف:
• حساسية ودقة عاليتان - تضمن الكواشف المُحسّنة، والأجسام المضادة النوعية لـ Rac1، وإجراءات لطخة ويسترن، ضوابط دقيقة ونتائج شبه كمية
• تم التحقق من صحتها - تم اختبارها وظيفيًا للكشف عن Rac1 لضمان الجودة والأداء
• متوافق - فعال مع مجموعة متنوعة من أنواع الخلايا من مصادر الفئران والجرذان والبشر. التطبيقات:
• تتبع تنشيط إنزيم Rac1 GTPase أثناء تمايز الخلايا، والهجرة، والانقسام، وإعادة ترتيب الهيكل الخلوي
• دراسة تكوين الصفائح الخلوية المعتمدة على Rac1
• دراسة دور Rac1 النشط في السرطان وتكوين الأوعية الدموية
• مراقبة نشاط Rac1 بعد التحفيز بعوامل النمو
• فحص مثبطات الجزيئات الصغيرة لتأثيرها على نشاط Rac1: تم التحقق من صحة مجموعة الكشف عن Rac1 النشط وطريقة إثراء Rac1 النشط باستخدام مستخلصات خلوية مُعالجة بـ GTPγS لتنشيط Rac1 الداخلي، ومقارنتها بمستخلصات مُعالجة بـ GDP لتعطيل GTPase الصغير. يحبس العلاج بـ GTPγS بروتين Rac1 في شكله النشط المرتبط بـ GTP، مما ينتج عنه إشارة قوية عند وجود Rac1 الداخلي. يدفع العلاج بـ GDP بروتين Rac1 إلى الحالة غير النشطة المرتبطة بـ GDP، مما ينتج عنه إشارة ضئيلة أو معدومة، بغض النظر عن مستويات بروتين Rac1. تم تحسين المجموعة للكشف باستخدام تقنية Western blot مع جسم مضاد ثانوي مقترن بـ HRP (جسم مضاد IgG مضاد للفأر من الماعز، رقم القطعة 31430) وركيزة Thermo Scientific SuperSignal West Pico الكيميائية المتألقة (رقم القطعة 34080). تحتوي المجموعة على مكونات كافية لإجراء 30 اختبار سحب.
خلفية Rac1: تؤدي بروتينات GTPases من عائلة Rho العديد من الوظائف الخلوية، بما في ذلك الإشارات الخلوية، وتنظيم النسخ، وتنظيم الهيكل الخلوي للأكتين. تتألف هذه العائلة من بروتينات Rho (RhoA، وRhoB، وRhoC)، وRac (Rac1، وRac2، وRac3، وRhoG)، وCdc42 (Cdc42 وG25K)، وRnd (Rnd1، وRnd2، وRhoE/Rnd3)، وعائلة RhoBTB، وعائلة Miro. تُمكّن هذه البروتينات من نقل الإشارات من غشاء البلازما إلى السيتوسول عبر مستقبلات البروتين المقترن بالبروتين G (GPCR)، ومستقبلات التيروزين كيناز، ومستقبلات السيتوكينات، ومستقبلات الالتصاق. يتم الارتباط بغشاء البلازما من خلال تعديلات دهون جيرانيل جيرانيل في الطرف الكربوكسيلي للبروتين. يؤدي تنشيط Rac1 إلى بلمرة الأكتين، ويظهر على شكل تموجات غشائية في محيط الخلية. كما يؤدي تنشيط Rac1 إلى تكوين الصفائح الخلوية (lamelipodia).
ينقل بروتين Rac1 GTPase الإشارات عبر كينازات التيروسين، وجزيئات الالتصاق، أو مستقبلات السيتوكينات/الكيموكينات بعد التحفيز بعوامل النمو (مثل عامل نمو البشرة، والأنسولين، وعامل نمو الصفائح الدموية، وعامل نمو الأعصاب)، أو الإنتغرينات (مثل الفيبرونيكتين)، أو عوامل الجذب الكيميائي (مثل fMLP). على سبيل المثال، يؤدي التحفيز بعامل نمو البشرة إلى تنشيط كيناز PI3، مما ينتج عنه نمو الخلايا وإعادة تنظيمها في محيط الخلية (تموج الغشاء). وبالمثل، يؤدي إرسال إشارات كيناز مستقبلات التيروسين عبر Rac1 إلى تنشيط مسارات استجابة الإجهاد MAPK، وتحديدًا SAPK (JNK) وp38. ويؤدي تحفيز الخلايا بالفيبرونيكتين إلى انتشارها بوساطة الإنتغرينات. ومن بين البروتينات المؤثرة الرئيسية لـ Rac1، بروتين Pak1 وكيناز فوسفاتيديل إينوزيتول 4-فوسفات 5. يُعدّ Pak1 (p65 Pak) كينازًا يُنشّط مسار JNK، بينما يُعزّز كيناز فوسفاتيديل إينوزيتول 4-فوسفات 5-كيناز تجميع خيوط الأكتين. يُعدّ Rac ضروريًا لنمو الخلايا التائية وتحفيز تمايز الخلايا. مع ذلك، يمكن لعائلة Rho من بروتينات GTPases أن تعمل بشكل مُنشّط أثناء إشارات الخلية، وبشكل مُثبّط أثناء التمايز.
المزيد من بيانات المنتج
• قياس تنشيط البروتينات الصغيرة الرابطة لـ GTP عبر المؤثرات النهائية الخاصة بها
• الكشف عن بروتينات GTPases النشطة وتحديد موقعها في تمايز الخلايا العصبية: فحص قياس كمية البروتين
المقترن: HRP
الوصف: طقم سحب وكشف بيرس أكتيف راك 1
للاستخدام مع (التطبيق): سحب لأسفل
محتويات المجموعة: أكواب الدوران، 30 كوبًا، محلول عازل لعينة SDS (2X)، 1.
٥ مل، محلول التحلل/الربط/الغسل (١X)، ١٠٠ مل، GTPγS (١٠٠X)، ٥٠ ميكرولتر، بروتين اندماجي GST-Pak1-PBD، قارورة واحدة، راتنج أجاروز الغلوتاثيون، ٣ مل، GDP (١٠٠X)، ٥٠ ميكرولتر، أنابيب تجميع، ٩٠ أنبوبًا، جسم مضاد لـ Rac1، ٥ وحدات، ٥٠ ميكرولتر
الكمية: 30 تفاعلاً
خصائص الركيزة: ركيزة قائمة على البروتين
نوع الركيزة: ركيزة GTPase
الهدف: الكينازات (متعددة)، فوسفودايسترازات، أدينوسين ثلاثي الفوسفات، جي تي فوسفاتازات، فوسفاتازات
طريقة الكشف: لطخة ويسترن، التلألؤ الكيميائي
مجموعة اختبار المناعة: عمود الدوران
نوع الملصق: بدون ملصق
حجم الوحدة: كل وحدة