Thermo Fisher، 16120، طقم سحب واكتشاف Active Rap1

مجموعة سحب وكشف Rap1 النشط: مجموعة Thermo Scientific Pierce Active Rap1 Pull-Down and Detection Kit هي مجموعة كاملة للإثراء الانتقائي والكشف عن GTP المرتبط بـ Rap1 GTPase من خلال تفاعل بروتيني محدد مع مجال ربط البروتين RalGDS.
تتضمن مجموعة الكشف عن بروتين Rap1 النشط (Active Rap1 Pull-Down and Detection Kit) نطاق ربط Rap1 (RBD) المُنقّى والمُرتبط بـ GST-RalGDS، وراتنج الأغاروز المُرتبط بالغلوتاثيون، وعناصر تحكم موجبة وسالبة (GTPγS وGDP على التوالي)، ومحلول التحلل/الربط/الغسل، وجسم مضاد لبروتين Rap1، ومحلول العينة، وأعمدة الطرد المركزي، وأنابيب التجميع. وقد تم التحقق من صحة المجموعة باستخدام مستخلصات من خلايا NIH 3T3، وهي سلالة خلوية معروفة بنشاطها القوي لبروتين Rap1.
ميزات مجموعة Active Rap1 للسحب والكشف:
• حساسية ودقة عاليتان - تضمن الكواشف المُحسّنة، والأجسام المضادة النوعية لـ Rap1، وإجراءات لطخة ويسترن، ضوابط دقيقة ونتائج شبه كمية
• تم التحقق من صحتها - تم اختبارها وظيفيًا للكشف عن Rap1 لضمان الجودة والأداء
• متوافق - فعال مع مجموعة متنوعة من أنواع الخلايا من مصادر الفئران والجرذان والبشر. التطبيقات:
• تتبع تنشيط إنزيم Rap1 GTPase أثناء تمايز الخلايا، والهجرة، والانقسام، وإعادة ترتيب الهيكل الخلوي
• دراسة إشارات Rap1 النشطة في وصلات الخلايا والالتصاقات
• مراقبة نشاط Rap1 بعد التحفيز بعوامل النمو
• فحص مثبطات الجزيئات الصغيرة لتأثيرها على نشاط Rap1: تم التحقق من صحة مجموعة أدوات الكشف عن Rap1 النشط من حيث وظيفتها وخصوصية طريقة إثراء Rap1 النشط باستخدام مستخلصات خلوية مُعالجة بـ GTPγS لتنشيط Rap1 الداخلي، ومقارنتها بمستخلصات مُعالجة بـ GDP لتعطيل GTPase الصغير. يُحاصر العلاج بـ GTPγS بروتين Rap1 في شكله المرتبط بـ GTP (النشط)، مما ينتج عنه إشارة قوية عند وجود Rap1 الداخلي. يدفع العلاج بـ GDP بروتين Rap1 إلى الحالة المرتبطة بـ GDP (غير النشط)، مما ينتج عنه إشارة ضئيلة أو معدومة، بغض النظر عن مستويات بروتين Rap1. تم تحسين هذه المجموعة للكشف باستخدام تقنية Western blot باستخدام جسم مضاد ثانوي مُقترن بـ HRP (Goat Anti-rabbit IgG، رقم القطعة 31460) وركيزة Thermo Scientific SuperSignal West Pico الكيميائية المتألقة (رقم القطعة 34080). تحتوي المجموعة على مكونات كافية لإجراء 30 اختبار سحب.
خلفية عن بروتينات Rap: تُعدّ بروتينات Rap GTPases جزءًا من عائلة Ras من بروتينات GTPases، ويتم ترميزها بواسطة الجينات Rap1a وRap1b وRap2. تتشابه بروتينات Rap GTPases بنيويًا مع بروتينات Ras GTPases، ولها بروتينات مُؤثرة ومُنشطة مُتشابهة، على الرغم من اختلاف وظائفها عن وظائف Ras. فبينما يُشارك Ras في تكاثر الخلايا وبقائها، يُنظم Rap1 إعادة ترتيب الهيكل الخلوي، والتصاق الخلايا، وتكوين الوصلات الخلوية.
تتوسط منظمات Rap1 وRas ومؤثراتها النهائية خصوصية كل منهما. تحتوي عوامل تبادل النيوكليوتيدات الغوانينية (GEFs) الخاصة بـ Rap على نطاق تماثل CDC25 الذي يتوسط تفاعل تبادل GDP/GTP، ونطاق REM (نمط تبادل Ras). تشمل بعض عوامل تبادل النيوكليوتيدات الغوانينية الخاصة بـ Rap كلاً من C3G وEpac1 و2 وRasGRP2 وPDZ-GEF1 و2 وPLCε. نطاق الارتباط المستخدم في هذه المجموعة هو RalGDS، وهو عامل تبادل نيوكليوتيدات غوانيلات يحتوي على نطاق RA، والذي يتمتع Rap1 بألفة ارتباط أعلى به من Ras. تقوم بروتينات RapGAPs، بما في ذلك Rap1GAP وعائلة Spa-1، بإدخال سلسلة جانبية من الأسباراجين في جيب ارتباط النيوكليوتيدات لتحفيز تفاعل تحلل GTP. تشارك بروتينات Rap المؤثرة، بما في ذلك RAPL وRiam وAF-6 وKrit1 وRacGEFs وTiam1 وVav2 وRho GAPs وARAP3، في الوصلات بين الخلايا والالتصاق، وغالبًا ما تتمركز على الغشاء أو عند الوصلات بين الخلايا. بالإضافة إلى Ras، يوجد أيضًا تداخل بين بروتينات Rap وRho GTPases.
المزيد من بيانات المنتج
• قياس تنشيط البروتينات الصغيرة الرابطة لـ GTP عبر المؤثرات النهائية الخاصة بها: اختبار تحديد كمية البروتين
المقترن: HRP
الوصف: طقم بيرس أكتيف راب 1 للسحب والكشف
للاستخدام مع (التطبيق): السحب لأسفل
محتويات المجموعة: أنابيب تجميع، 90 أنبوبًا، GDP (100X)، 50 ميكرولتر، راتنج أجاروز الغلوتاثيون، 3 مل، بروتين اندماج GST-RalGDS-RBD، قارورة واحدة، GTPγS (100X)، 50 ميكرولتر، محلول التحلل/الربط/الغسل (1X)، 100 مل، محلول عينة SDS (2X)، 1.
٥ مل، أكواب دوارة، ٣٠ كوبًا، جسم مضاد لـ Rap1، ٥ وحدات، ٥٠ ميكرولتر
الكمية: 30 تفاعلاً
خصائص الركيزة: ركيزة قائمة على البروتين
نوع الركيزة: ركيزة GTPase
الهدف: الكينازات (متعددة)، فوسفودايسترازات، أدينوسين ثلاثي الفوسفات، جي تي فوسفاتازات، فوسفاتازات
طريقة الكشف: لطخة ويسترن، التلألؤ الكيميائي
مجموعة اختبار المناعة: عمود الدوران
نوع الملصق: بدون ملصق
حجم الوحدة: كل وحدة