Thermo Fisher، 20164، مجموعة Pierce™ المغناطيسية لسحب البروتين من الحمض النووي الريبي Thermo Scientific™

مجموعة سحب البروتين-RNA المغناطيسية Pierce™ من Thermo Scientific™ توفر مجموعة سحب البروتين-RNA المغناطيسية Pierce من Thermo Scientific للباحثين طريقة مبسطة وقوية لإثراء تفاعلات البروتين-RNA باستخدام RNA المسمى في النهاية كطعم.
مميزات مجموعة سحب البروتين-الحمض النووي الريبي المغناطيسي: مباشر - التقاط معقدات البروتين النووي الريبي مباشرة باستخدام الحمض النووي الريبي الموسوم في نهايته؛ لا يستخدم أو يتطلب أجسامًا مضادة للسحب. سهل الاستخدام - لا حاجة إلى أكواب الطرد المركزي أو الطرد المركزي لإثراء البروتين النووي الريبي؛ تم تبسيط الإجراء لتقليل وقت العمل اليدوي (أقل من 3 ساعات) بعد تفاعل وسم الحمض النووي الريبي. مرن - استخدام الحمض النووي الريبي المنسوخ في المختبر أو الحمض النووي الريبي الاصطناعي لوسم أطوال وتعقيدات مختلفة؛ تم إثراء البروتينات بنجاح باستخدام المستخلصات الداخلية، والمفرطة التعبير، والمترجمة في المختبر. محدد - خلفية منخفضة للخرز؛ لا يؤدي الحمض النووي الريبي غير ذي الصلة أو الحمض النووي الريبي المتحور إلى إثراء البروتينات النووية الريبية المحددة بشكل كبير. اقتصادي - أقل تكلفة من شراء الحمض النووي الريبي المصنّع تجاريًا والموسوم في نهايته، والخرز المغناطيسي، والكواشف بشكل منفصل. كامل - يحتوي على وحدات الوسم والإثراء مع المحاليل المنظمة اللازمة للفحص؛ تتضمن مجموعة سحب البروتين-الحمض النووي الريبوزي المغناطيسية (RNA-Protein Pull-Down Kit) عناصر تحكم إيجابية وسلبية، بالإضافة إلى أجسام مضادة لبروتينات ربط الحمض النووي الريبوزي (RBP). توفر هذه المجموعة كواشف لإثراء بروتينات ربط الحمض النووي الريبوزي (RBPs) بكفاءة باستخدام خرز مغناطيسي موسوم بنهاية الحمض النووي الريبوزي (RNA) باستخدام ديسثيوبيوتين وستربتافيدين. تحتوي المجموعة الكاملة على كمية كافية من الكواشف لإجراء 20 تفاعل وسم للحمض النووي الريبوزي (RNA) و20 اختبار سحب للبروتين-الحمض النووي الريبوزي (RNA). يوفر هذا الإثراء المباشر لتفاعل البروتين-الحمض النووي الريبوزي (RNA) بديلاً عن التقاط الأجسام المضادة لمركبات أو أجزاء البروتين-الحمض النووي الريبوزي (RNA) المدمجة في الحمض النووي. ومن المزايا الإضافية لهذه المجموعة أنها تتضمن عناصر تحكم معتمدة لكل من الوسم واختبار السحب. كما أن المجموعة مناسبة للعديد من التطبيقات اللاحقة، بما في ذلك تقنية التلطيخ الغربي (Western blotting) وقياس الطيف الكتلي (MS).
يشمل: مجموعة كاملة تحتوي على مجموعة بيرس لإزالة البيوتين من الطرف 3' للحمض النووي الريبي، وعينات تحكم موجبة وسالبة للحمض النووي الريبي، وخرزات مغناطيسية من الستربتافيدين متوافقة مع الأحماض النووية، ومحاليل منظمة لإثراء البروتينات الرابطة للحمض النووي الريبي وفصلها. يتطلب: حمض نووي ريبي ومستخلص خلوي (عينة تجريبية) من المستخدم. التطبيقات: تحليل الطفرات، تحليل البنية والوظيفة، تحديد تفاعلات الحمض النووي الريبي مع البروتين، تحليل الطيف الكتلي لأزواج أو معقدات ربط الحمض النووي الريبي مع البروتين غير المعروفة. يُعد استخدام الحمض النووي الريبي الموسوم كطعم لإثراء البروتينات الرابطة للحمض النووي الريبي أفضل من الإثراء بالأجسام المضادة، لأنه يلتقط التفاعل مباشرةً. تتضمن هذه المجموعة مجموعة بيرس لإزالة البيوتين من الطرف 3' للحمض النووي الريبي، والتي تستخدم إنزيم T4 RNA ligase لربط نيوكليوتيد سيتيدين ثنائي الفوسفات واحد بالطرف 3' للحمض النووي الريبي أحادي السلسلة.
يمكن استخدام ديسثيوبيوتين للكشف أو كعامل ربط قابل للذوبان. وقد تم تحسين طول الفاصل بين النيوكليوتيد وديسثيوبيوتين لضمان ارتباط فعال بالخرز دون التأثير على إمكانية وصول البروتين إلى الحمض النووي الريبي.
تم تحسين إجراء إثراء البروتينات الرابطة للحمض النووي الريبوزي (RNA) لتسهيل استخدامه. يُلتقط الحمض النووي الريبوزي الموسوم أولًا على الخرز لتوجيهه نحو الارتباط بالبروتين. ثم تُعادِل الخرزات المرتبطة بالحمض النووي الريبوزي في محلول منظم خاص بربط البروتين بالحمض النووي الريبوزي قبل إضافة مستخلص البروتين. بعد الغسل، يمكن استخلاص العينة باستخدام محلول استخلاص البيوتين غير المشوه أو محلول تحميل SDS-PAGE. تصبح العينات المستخلصة جاهزة لمجموعة متنوعة من التطبيقات اللاحقة، بما في ذلك التحليل المناعي الغربي أو قياس الطيف الكتلي.
يستخدم نظام التحكم في اختبار الترسيب الحمضي النووي الريبوزي (RNA) لمستقبلات الأندروجين (AR) في المنطقة غير المترجمة 3'، وRNA متعدد الأدينين 25 (poly(A)25 RNA)، ومستخلص خلايا الثدييات. تحتوي المنطقة غير المترجمة 3' القريبة (UTR) من RNA لمستقبلات الأندروجين على مناطق غنية بالـ UC لبروتينات ربط HuR وبروتينات ربط متعدد السيتوزين (CP1 وCP2). تنظم هذه البروتينات الرابطة للـ RNA استقرار mRNA (HuR) ودوران mRNA وترجمته (CP1 وCP2). أما RNA الضابط السلبي، وهو RNA متعدد الأدينين 25 (poly(A)25 RNA)، فلا يحتوي على مواقع ربط HuR أو بروتينات ربط متعدد السيتوزين (poly(C)).
التنسيق: مجموعة
محتويات المجموعة: 50 بيكومول من الحمض النووي الريبي لكل تفاعل
الكمية: مجموعة من 20 تفاعلًا
يكفي لـ: 20 تفاعلًا
السعة (بالوحدات المترية): 1 مل
خط الإنتاج: بيرس™
النوع: مجموعة سحب البروتين من الحمض النووي الريبي
حجم الوحدة: كل وحدة