Thermo Fisher، 4391848، مجموعة TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™

مجموعة TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ من Ambion™ تُمكّن من إجراء تحليل التعبير الجيني للـ microRNA (miRNA) مباشرةً من الخلايا المزروعة دون الحاجة إلى تنقية الحمض النووي الريبوزي (RNA). تُعدّ هذه المجموعة الأولى من نوعها التي تُقدّم سير عمل بسيطًا وشاملاً لتحليل التعبير الجيني للـ miRNA من عينات قليلة، كما يُمكن دمجها بسهولة في تطبيقات آلية عالية الإنتاجية.
• حل كامل ومُعتمد - يتضمن سير العمل المُحسّن كواشف تحلل الخلايا، وDNase، وكواشف TaqMan™ MicroRNA RT، ومزيج TaqMan™ Universal PCR Master Mix
• سريع وبسيط ومريح - تحضير العينات في 10 دقائق؛ التخلص من عملية عزل الحمض النووي الريبي (RNA) المرهقة
• دقة فائقة - حقق نتائج متميزة باستخدام كواشف TaqMan™ MicroRNA
• أداء قوي - نتائج مكافئة للحمض النووي الريبي النقي
• نطاق ديناميكي واسع للإدخال - كشف خطي من 10 إلى 100,000 خلية. حل كامل ومُدقَّق: يتميز طقم TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ بطريقة فريدة لتحليل الخلايا المزروعة مع إزالة الحمض النووي الجينومي والحفاظ على سلامة الحمض النووي الريبوزي (RNA). يحتوي الطقم على كواشف النسخ العكسي TaqMan™ MicroRNA ومزيج TaqMan™ Universal PCR Master Mix لتحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي (PCR). خضع طقم TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ لاختبارات مكثفة وتم التحقق من صحته باستخدام فحوصات TaqMan™ MicroRNA، والتي تُباع بشكل منفصل.
تحضير عينة بسيط ومريح في 10 دقائق: تتضمن مجموعة TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ إجراءً بسيطًا لتحضير العينة في 10 دقائق فقط (الشكل 1) لاستخدامها مع 10-100,000 خلية مزروعة/عينة، سواء في أطباق أو أنابيب. تُغسل الخلايا بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) وتُحلل لمدة 8 دقائق في درجة حرارة الغرفة؛ ويمكن إجراء معالجة DNase في الوقت نفسه. يُوقف التحلل في درجة حرارة الغرفة بحضانة لمدة دقيقتين مع محلول الإيقاف.
أصبحت مستخلصات مجموعة TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ جاهزة الآن للنسخ العكسي، أو يمكن تخزينها عند درجة حرارة -20 درجة مئوية لمدة تصل إلى 5 أشهر. ولأن العينات لا تخضع لعملية تنقية الحمض النووي الريبوزي (RNA)، فإن جميع أنواع الحمض النووي الريبوزي الصغير متاحة للتحليل. ولأن العينات يمكن معالجتها مباشرةً في أطباق الاستزراع (96 أو 384 بئرًا)، فإن التعامل مع العينات يقل، ويقل خطر فقدانها أو حدوث أخطاء في نقلها إلى أدنى حد. لا حاجة للتسخين أو الغسل أو الطرد المركزي؛ إذ تُبسط المجموعة بشكل كبير عمليةً كانت تستغرق وقتًا طويلاً وجهدًا كبيرًا، وتختصرها إلى 10 دقائق فقط.
معيار ذهبي للدقة - نتائج فائقة مع كواشف TaqMan™ MicroRNA: طورت شركة Applied Biosystems حلاً متطوراً للمشكلة الأساسية المرتبطة بقصر طول جزيئات miRNA الناضجة. تتضمن فحوصات TaqMan™ MicroRNA (تُباع منفصلة) بادئاً فريداً من نوعه، مُصمماً خصيصاً لاستهداف جزيء miRNA ناضج محدد (الشكل 2). صُمم هذا البادئ لضمان دقة عالية في تحديد جزيء miRNA الناضج المستهدف، على عكس الطرق الأخرى التي تُطيل وتُهيئ جميع جزيئات RNA في العينة بشكل عشوائي. صُممت كواشف TaqMan™ MicroRNA RT، المضمنة في مجموعة TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™، خصيصاً للعمل بالتزامن مع تصميم هذا الفحص المبتكر.
تُعدّ القدرة على التمييز بين أهداف miRNA الناضجة شديدة التشابه ضروريةً لتحليل دقيق لتعبير miRNA. توفر مجموعة TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™، بالاشتراك مع فحوصات TaqMan™ MicroRNA، الخصوصية اللازمة للتمييز بين الأهداف شديدة التشابه، كما هو موضح في الشكل 3. في هذا المثال، استُخدمت مستخلصات من مجموعة TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ أو miRNA مُنقّى في تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (PCR) باستخدام فحوصات TaqMan™ MicroRNA للكشف عن اختلافات القاعدة المفردة في قوالب miRNA المُضافة خارجيًا. كانت الخصوصية المُتحصّل عليها باستخدام مستخلصات مجموعة TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ (الشكل 3أ) مُكافئةً لتلك المُتحصّل عليها باستخدام RNA مُنقّى (الشكل 3ب).
أداء قوي - نتائج مماثلة للحمض النووي الريبوزي النقي: خضعت هذه المجموعة الجديدة لاختبارات مكثفة باستخدام مجموعة واسعة من فحوصات TaqMan™ MicroRNA، وأظهرت أداءً مماثلاً لما تم الحصول عليه باستخدام الحمض النووي الريبوزي النقي (الشكل 4). تتيح آلية عمل مجموعة TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ تقييمًا فائقًا لتعبير الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA) مع أكثر من 900 فحص متاح من فحوصات TaqMan™ MicroRNA.
نطاق ديناميكي واسع للإدخال - كشف خطي من 10 إلى 100,000 خلية: نظرًا لأن مستويات التعبير عن الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA) قد تختلف اختلافًا كبيرًا تبعًا لنوع العينة أو المرحلة التطورية أو تطور المرض، فمن المهم امتلاك أدوات حساسة لتحليل التعبير عن الحمض النووي الريبوزي الميكروي. الآن، يمكن قياس أهداف الحمض النووي الريبوزي الميكروي التي تتراوح من بضع نسخ إلى ملايين النسخ بدقة في نفس التجربة.
تعمل مجموعة TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ بكفاءة عالية مع عدد قليل من الخلايا يصل إلى 10 خلايا، وحتى 100,000 خلية. ولتحقيق أقصى حساسية، تسمح هذه المجموعة بأن يشكل مستخلص العينة ما يصل إلى 33% من حجم تفاعل النسخ العكسي (RT) (نسخ عكسي أحادي). يوضح الشكل 5 خطية وحساسية الكشف باستخدام مستخلصات مجموعة TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ عبر 5 لوغاريتمات من مدخلات الخلايا لكل تفاعل تحلل؛ وكانت النتائج مماثلة للحمض النووي الريبي النقي. بالإضافة إلى ذلك، لا تتأثر النطاقات الديناميكية الواسعة لتحليلات TaqMan™ MicroRNA باستخدام مستخلصات مجموعة TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ (البيانات غير معروضة).
أداءٌ مُثبت، مُثبتٌ معًا: تم تحسين جميع مكونات مجموعة TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ لضمان أداءٍ ثابتٍ وموثوق. هذا يُغني عن التخمين المُصاحب لتجميع مجموعاتٍ منفصلةٍ لتحضير العينات، والنسخ العكسي، وتفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي. تم التحقق من صحة مجموعة TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ باستخدام فحوصات TaqMan™ MicroRNA لضمان جودةٍ إضافية.
للاستخدام مع (الأجهزة): نظام 7000، نظام 7300، نظام 7500، نظام 7900HT، نظام Applied Biosystems StepOnePlus™ Fast Real-Time PCR، StepOne™، الوضع القياسي، StepOnePlus™، الوضع القياسي، أنظمة QuantStudio 6 و7 Pro، نظام QuantStudio 7 Flex، أنظمة QuantStudio 3 و5، نظام QuantStudio 12k Flex، نظام QuantStudio 6 Flex
التنسيق: أنبوب
الميزات الصديقة للبيئة: استخدام موارد أقل ونفايات أقل، مخاطر أقل
عدد التفاعلات: 100 تفاعل
صبغة مرجعية سلبية: ROX (مخلوطة مسبقًا)
بوليميراز: بوليميراز الحمض النووي
خط الإنتاج: Ambion™، Cells-to-CT™، TaqMan™
نوع المنتج: مجموعة MicroRNA Cells-to-C
الكمية: 100 تفاعل
إنزيم النسخ العكسي: M-MLV
نوع العينة: خلية
شروط الشحن: ثلج جاف
يكفي لـ: 100 تفاعل
طريقة الكشف: البادئ والمسبار
للاستخدام مع (التطبيق): تحليل الحمض النووي الريبوزي الميكروي
أداء تفاعل البوليميراز المتسلسل الغني بالـ GC: عالٍ
طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل: تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي العكسي على مرحلتين
سرعة رد الفعل: قياسية
حجم الوحدة: كل وحدة