Thermo Fisher، 4399003، مجموعة TaqMan™ Fast Cells-to-CT™

مجموعة TaqMan™ Fast Cells-to-CT™ تجعل من الممكن استخدام كيمياء وأجهزة تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي ذات الدورات السريعة لإجراء تحليل التعبير الجيني مباشرة من الخلايا المزروعة دون تنقية الحمض النووي الريبي.
مجموعة TaqMan™ Fast Cells-to-CTKit هي:
• سير عمل كامل ومُحسَّن يتضمن كواشف تحلل الخلايا مع إزالة الحمض النووي الجينومي، ومزيج إنزيم النسخ العكسي، ومحلول النسخ العكسي، ومزيج TaqMan™ Fast Universal PCR Master Mix
• سريع - تحضير العينات في درجة حرارة الغرفة خلال 7 دقائق، بما في ذلك معالجة DNase؛ يوفر مزيج TaqMan™ Fast Universal PCR Master Mix نتائج تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي في حوالي 35 دقيقة
• مريح - قم بتحليل العينات في أنبوب أو مباشرة في أطباق زراعة مكونة من 96 أو 384 بئراً
• قوي - إجراء تحليل التعبير الجيني على 10 إلى 100000 خلية لكل عينة، بنتائج مكافئة لتلك التي يتم الحصول عليها من الحمض النووي الريبي النقي
• فعال - يحتوي على كمية كافية من الكواشف لإنتاج 500 نتيجة تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (PCR) من 100 عينة أولية. حل كامل ومُدقَّق. تتميز تقنية TaqMan™ Cells-to-CT™ بطريقة فريدة لتحليل الخلايا المزروعة مع إزالة الحمض النووي الجينومي (gDNA) والحفاظ على سلامة الحمض النووي الريبوزي (RNA). بالإضافة إلى ذلك، تحتوي المجموعة على كواشف النسخ العكسي (RT) ومزيج TaqMan™ Fast Universal PCR Master Mix لتحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي السريع، وقد تم اختبارها والتحقق من صحتها على نطاق واسع باستخدام فحوصات TaqMan™ Gene Expression المعيارية، والتي تُباع بشكل منفصل. تم تحسين جميع مكونات المجموعة للعمل معًا من أجل أداء متسق وموثوق، مما يُغني عن التخمين المصاحب لتجميع مجموعات منفصلة لإعداد العينات والنسخ العكسي وتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي السريع.
سير عمل سريع ومريح: تتضمن مجموعة TaqMan™ Fast Cells-to-CT™ إجراءً بسيطًا لتحضير العينات يستغرق 7 دقائق فقط (انظر الشكل) لاستخدامها مع 10 إلى 100,000 خلية مزروعة مباشرةً في أطباق زراعة الخلايا ذات 96 أو 384 بئرًا أو في أنابيب. تُغسل الخلايا بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) وتُحلل لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة؛ ويمكن إجراء معالجة اختيارية باستخدام إنزيم DNase في الوقت نفسه. يُوقف التحليل في درجة حرارة الغرفة بحضانة لمدة دقيقتين مع محلول الإيقاف. تُبسط هذه المجموعة بشكل كبير عمليةً كانت تستغرق وقتًا طويلاً وتتطلب جهدًا كبيرًا، وتختصرها إلى 7 دقائق فقط.
أصبحت المستخلصات جاهزة الآن لعملية النسخ العكسي باستخدام نظام النسخ العكسي المُحسَّن المُضمَّن في المجموعة، أو يُمكن تخزينها عند درجة حرارة -20 درجة مئوية لمدة تصل إلى 5 أشهر لتحليلها لاحقًا. يُوفِّر مزيج TaqMan™ Fast Universal PCR Master Mix المُرفق نتائج حساسة وقابلة للتكرار أسرع بثلاث مرات تقريبًا من كواشف وأجهزة تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) القياسية. يُمكِّن الجمع بين تحضير العينات السريع والبسيط، ونتائج تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي سريع الدورة (حوالي 35 دقيقة)، من تحديد كمية الجينات المستهدفة بشكل أسرع من السابق. تُقلِّل آلية عمل مجموعة TaqMan™ Fast Cells-to-CT™ الوقت اللازم للحصول على النتيجة من العينة بنسبة 40% أو أكثر، مقارنةً بتنقية الحمض النووي الريبوزي (RNA) التقليدية وتفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي القياسي.
نتائج قوية وحساسة وموثوقة. لطالما شكل التحليل الدقيق للتعبير الجيني عبر نطاق واسع من عينات الإدخال، للجينات ذات مستويات التعبير المختلفة، تحديًا للباحثين. لذا، يُعدّ الحل القوي ضروريًا لتحليل الحمض النووي الريبوزي (RNA) من عدد قليل أو كبير من الخلايا. يوضح الشكل التالي خطية الإشارة الممتازة (R² = 0).
تمت ملاحظة (997) باستخدام مستخلصات من مجموعة TaqMan™ Fast Cells-to-CT™ عبر 5 لوغاريتمات من المدخلات الخلوية (10-105 خلية لكل تفاعل تحلل) (انظر الشكل). وبالتالي، يمكن استخدام مجموعة واحدة لتحليل التعبير الجيني من عينات محدودة أو كثيفة، دون أي تأثير سلبي على سلامة البيانات بسبب مثبطات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR).
كان أداء تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) لمستخلصات الخلايا باستخدام مجموعة TaqMan™ Fast Cells-to-CT™ مكافئًا لأداء الحمض النووي الريبي (RNA) النقي، باستخدام مزيج TaqMan™ Fast Universal PCR Master Mix المرفق (انظر الشكل). أظهر كل من مستخلصات الخلايا باستخدام مجموعة TaqMan™ Cells-to-CT™ والحمض النووي الريبي النقي كشفًا خطيًا ضمن نطاق 5 لوغاريتمات من مكافئات إدخال الخلايا. تعود الحساسية المحسّنة عند إدخال 10 خلايا باستخدام مستخلصات الخلايا باستخدام مجموعة TaqMan™ Fast Cells-to-CT™ مقارنةً بالحمض النووي الريبي النقي، باستخدام نفس كواشف النسخ العكسي (RT) وتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، إلى احتفاظ أكثر كفاءة بالجزيئات المستهدفة أثناء التحضير.
أي، عدم فقدان الحمض النووي الريبي المرتبط عادةً بنقل العينة أو تسخينها.
أظهرت مجموعة TaqMan™ Fast Cells-to-CT™ أداءً فائقًا مقارنةً بالحمض النووي الريبوزي (RNA) النقي الذي تم نسخه عكسيًا وتضخيمه بتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) باستخدام مزيج النسخ العكسي ومزيج Fast Master Mix من شركة Competitor Q. بلغ النطاق الديناميكي المُلاحَظ باستخدام كواشف Competitor Q مع دورات Fast ما يعادل 10² إلى 10⁵ خلية، أي أقل بمقدار لوغاريتمي واحد من مستخلصات مجموعة TaqMan™ Cells-to-CT™ أو الحمض النووي الريبوزي النقي المُضخّم باستخدام مزيج TaqMan™ Fast Universal PCR Master Mix (انظر الشكل). صُمم مزيج TaqMan™ Fast Universal PCR Master Mix لتقديم نتائج حساسة وقابلة للتكرار بسرعة أكبر من تلك الممكنة باستخدام الكواشف والأجهزة القياسية، وهو فعال للغاية عبر نطاق واسع من الجينات المستهدفة والتركيزات.
للاستخدام مع (المعدات): نظام 7500 السريع، نظام 7900HT السريع، StepOne™، الوضع السريع، StepOnePlus™، الوضع السريع
التنسيق: أنبوب
الميزات الصديقة للبيئة: استخدام موارد أقل ونفايات أقل، مخاطر أقل
عدد التفاعلات: 100 تفاعل
صبغة مرجعية سلبية: ROX (مخلوطة مسبقًا)
بوليميراز: بوليميراز الحمض النووي
خط الإنتاج: Ambion™، Cells-to-CT™، TaqMan™
نوع المنتج: مجموعة تحويل الخلايا إلى خلايا سريعة
الكمية: 100 تفاعل
إنزيم النسخ العكسي: M-MLV
نوع العينة: خلية
شروط الشحن: ثلج جاف
يكفي لـ: 100 تفاعل
طريقة الكشف: البادئ والمسبار
للاستخدام مع (التطبيق): التعبير الجيني
أداء تفاعل البوليميراز المتسلسل الغني بالـ GC: منخفض
طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل: تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي العكسي على مرحلتين
سرعة رد الفعل: سريعة
حجم الوحدة: كل وحدة