Thermo Fisher، 4458236، مجموعة Single Cell-to-CT™ qRT-PCR

تحتوي مجموعة Ambion™ Single Cell-to-CT™ على 400 تفاعل، وتتضمن سير عمل كاملًا ومعتمدًا لتحليل التعبير الجيني للعينات التي تحتوي على 1-10 خلايا. تحتوي كل مجموعة على كواشف لتحضير العينات، والنسخ العكسي، والتضخيم المسبق، والتفاعل التسلسلي الكمي للبوليميراز (qPCR)، وقد تم تحسينها معًا في سير عمل بسيط يمكن إكماله في 5 خطوات فقط (انظر الشكل).
أهم ميزات المنتج: سير عمل مُحسَّن مسبقًا لتحليل RT-PCR في الوقت الحقيقي من الخلايا المفردة، حساسية قصوى لتحليل الخلايا المفردة، أداء فائق وقابلية تكرار عالية مقارنةً بالطرق البديلة، سهولة استخدام المجموعة الكاملة وبروتوكول سهل الاتباع. يضمن البروتوكول المُحسَّن مسبقًا النجاح ويوفر الوقت. يبدأ كل سير عمل بتحضير بسيط للعينة لمدة 7 دقائق، حيث يتم تحليل الخلايا بكفاءة وقابلية تكرار عالية بأقل قدر من المعالجة إلى محلول متوافق مع RT-PCR اللاحق، دون الحاجة إلى تنقية. يلي ذلك استخدام Superscript™ RT للنسخ العكسي، وTaqMan™ PreAmp Master Mix لتضخيم الحمض النووي التكميلي (cDNA)، وTaqMan™ Gene Expression Master Mix لـ qPCR. تم تطوير جميع هذه الخطوات الأربع لتوفير أقصى حساسية. يتم الحفاظ على عينة الخلية بأكملها في نفس البئر طوال الإجراء، لذلك لا يوجد فقدان للعينة أو تخفيف للمادة الثمينة المحدودة التي قد تؤثر على الحساسية.
حساسية الخلايا المفردة: قد تتأثر حساسية نتائج تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) في الوقت الحقيقي بكفاءة تحضير العينة، أو النسخ العكسي، أو التضخيم. وقد عالجت مجموعة Single Cell-to-CT™ Kit كلًا من هذه المشكلات المحتملة لتوفير حل يُمكّن من تحليل التعبير الجيني الموثوق والدقيق من الخلايا المفردة بأقصى حساسية. يُظهر الكشف عن مكافئات الخلايا المفردة باستخدام مجموعة Single Cell-to-CT™ Kit خطية وحساسية مناسبتين لنتائج تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) مقارنةً بعينة تحكم مكونة من 100 خلية، مع قابلية تكرار تقنية ممتازة (انظر الشكل). وكما هو متوقع، تُظهر الخلايا المفردة تباينًا أكبر نظرًا للتغاير البيولوجي المتأصل. بالإضافة إلى ذلك، ومن خلال تضمين خطوة التضخيم المسبق للحمض النووي التكميلي (cDNA)، يتم تضخيم الأهداف محل الاهتمام بدقة قبل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR). تُعزز هذه الخطوة الحاسمة الإشارة بطريقة غير متحيزة، مما يُوسع نطاق تحليل العينات المحدودة. يوضح الشكل دقة وتحسين إشارة لوحة مكونة من 96 جينًا باستخدام التضخيم المسبق.
أداء فائق وقابلية تكرار عالية مقارنةً بالطرق البديلة. لا تُعدّ طرق تحضير العينات التقليدية التي تستخدم المذيبات العضوية أو مرشحات الألياف الزجاجية أو الخرز المغناطيسي مناسبةً لتحليل الخلايا المفردة نظرًا لفقدان العينة بسبب عدم اكتمال ترسيب الحمض النووي الريبي (RNA) وارتباطه وإذابته. إضافةً إلى ذلك، تفتقر معظم طرق تحليل الخلايا المفردة المُحضّرة منزليًا، والتي تعتمد على الغليان البسيط لتحليل الخلايا، إلى القدرة على تعطيل إنزيمات الريبونوكلياز الداخلية (RNases) لتحقيق استقرار أنماط التعبير الجيني، وقد تؤدي إلى انقسام كيميائي للحمض النووي الريبي (RNA) وانتقال المُثبِّطات، بما في ذلك تلوث الحمض النووي الجينومي (gDNA)، مما قد يؤثر على جميع تطبيقات تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (qRT-PCR). في المقابل، تُظهر مجموعة Single Cell-to-CT™ حساسيةً وقابلية تكرار فائقة لتحليل الخلايا المفردة مقارنةً بطرق التنقية التقليدية أو طرق الغليان المُحضّرة منزليًا (انظر الشكل).
للاستخدام مع (الأجهزة): نظام 7000، نظام 7300، نظام 7500، نظام 7900HT السريع، نظام 7900HT، GeneAmp 9700، GeneAmp™ 2400، StepOne™، الوضع السريع، StepOne™، الوضع القياسي، StepOnePlus™، الوضع السريع، StepOnePlus™، الوضع القياسي، جهاز التدوير الحراري Veriti
الميزات الصديقة للبيئة: استخدام موارد أقل ونفايات أقل، ومخاطر أقل
عدد التفاعلات: 400 تفاعل
خط الإنتاج: أمبيون™، سيلز-تو-سي تي™
مدة التنقية: 7 دقائق.
الكمية: 400 تفاعل
نوع العينة: خلايا ثديية
شروط الشحن: ثلج جاف
المواد الأولية: 1-10 خلايا
طريقة الكشف: تاكمان
للاستخدام مع (التطبيق): RT-PCR
طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل: تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي العكسي على مرحلتين
سرعة رد الفعل: 7 دقائق.
حجم الوحدة: كل وحدة