Thermo Fisher، 70073Z2500UN، إكسونوكلياز I، تركيز قياسي، (10 وحدات/ميكرولتر)

وصف المنتج (2500 وحدة): يقوم إنزيم إكسونوكلياز I بتحليل الحمض النووي أحادي السلسلة في الاتجاه 3'→5'، مُحررًا أحادي النوكليوتيدات الطرفية 5'، تاركًا ثنائي النوكليوتيد الطرفي 5' سليمًا. عملية التحليل متتابعة ولا يمكن أن تستمر إذا كان الطرف 3' مُفسفرًا. يُمكن استخدام إكسونوكلياز I لقياس الانشطار الداخلي للحمض النووي أحادي السلسلة الدائري المُغلق تساهميًا، والذي يتفاعل مع إنزيم داخلي مُحدد. بالإضافة إلى ذلك، يُمكن قياس نشاط إنزيم هيليكاز الحمض النووي باستخدام إكسونوكلياز I.
يُعدّ إنزيم إكسونوكلياز I مفيدًا بشكل خاص في تحضير نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) لتطبيقات التسلسل أو الوسم. عادةً، تتداخل البادئات الزائدة وأي حمض نووي أحادي السلسلة دخيل آخر موجود في نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل مع التفاعلات الإنزيمية اللاحقة التي تتضمن تخليق الحمض النووي. تعمل الخصائص التحليلية لإنزيم إكسونوكلياز I على تحليل جميع الحمض النووي أحادي السلسلة الموجود في خليط تفاعل البوليميراز المتسلسل، مما يسمح باستخدام الناتج بكفاءة أكبر في تطبيقات أخرى. عند دمجه مع فوسفاتاز القلوي المستخلص من الروبيان (PN 78390) لإزالة الفوسفات من النيوكليوتيدات ثلاثية الفوسفات (dNTPs)، يتم الاستغناء تمامًا عن استخدام طرق التنقية البديلة، مثل الأعمدة أو الهلام أو الفصل المغناطيسي.
للحصول على معلومات حول تنقية نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) باستخدام إنزيم إكسونوكلياز I، يُرجى مراجعة بروتوكول USB ExoSAP-IT. يُتيح شراء ExoSAP-IT ترخيصًا لاستخدام طرق تنقية نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) باستخدام إنزيم إكسونوكلياز I وSAP.
الخصائص: الوزن الجزيئي: 55 كيلو دالتون، التعطيل الحراري: 80 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
يتحلل إلى ثنائيات نيوكليوتيدات طرفية.
يُحلل الحمض النووي المُغلّف بالجليكوزيل.
درجة الحرارة المثلى: 37 درجة مئوية. النقاء: أكثر من 95% كما تم تحديده بواسطة SDS-PAGE. تم اختباره للتأكد من خلوه من الملوثات من الإنزيمات الداخلية، والإنزيمات الخارجية ثنائية السلسلة، والإنزيمات الريبية.
محلول التخزين: 20 ملي مولار Tris-HCl (الأس الهيدروجيني 7).
5)، 5 ملي مولار 2-مركابتوإيثانول، 0.
5 مليمول من الإيثيلين ديامين رباعي حمض الأسيتيك، 50% جلسرين.
شروط الفحص: يحتوي خليط التفاعل (100 ميكرولتر) على محلول منظم من الجليسين بتركيز 67 ملي مولار (الأس الهيدروجيني 9).
5)، 10 ملي مول من 2-مركابتوإيثانول، 6.
7 ملي مولار من كلوريد المغنيسيوم، 0.
5 ملي مول من الحمض النووي المنزوع الطبيعة، والإنزيم. تتم عملية التحضين عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
تعريف الوحدة: الوحدة الواحدة هي كمية الإنزيم التي تحفز إطلاق 10 نانومول من النيوكليوتيد القابل للذوبان في الأحماض من الحمض النووي المتفكك في 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية في ظل الظروف القياسية.
التركيز: التركيز القياسي: 10 وحدات/ميكرولتر، PN 70073 التركيز العالي: 20 وحدة/ميكرولتر، PN 72073 الفحص الوظيفي: يتم معالجة منتج PCR باستخدام Exonuclease I لتحليل البادئات غير المدمجة قبل إجراء تفاعل التسلسل باستخدام Sequenase™ الإصدار 2.
0 مجموعة تسلسل بوليميراز الحمض النووي (PN 70170).
المراجع: جولدمارك، بي جيه ولين، إس. (1972) مجلة الكيمياء البيولوجية.
247، 1849-1860.
ROSAMOND, J., TELANDER, KM AND LINN, S. (1979)J. Biol. Chem.
254، 8646-8652.
WERLE, E., SCNEIDER C., RENNER, M., VÖLKER, M. and FIEHN, W. (1994) دقة الأحماض النووية.
22، 4354-4355.
هانكي، م. ووينك، م. (1994) التقنيات الحيوية 17، 858-860.
المحلول المنظم المتوافق: محلول التخزين، محلول الجلايسين
نوع المنتج: إكسونوكلياز 1
الكمية: 2500 وحدة
التركيز: 10 وحدة/ميكرولتر
الإنزيم: إكسونوكلياز
حجم الوحدة: كل وحدة