إنزيم بوليميراز الحمض النووي Sequenase الإصدار 2.0 من شركة Thermo Fisher، رقم الموديل 70775Z1000UN

Thermo Fisher، 70775Z1000UN، Sequenase الإصدار 2.
0 وصف بوليميراز الحمض النووي: سيكويناز™ الإصدار 2.
إنزيم بوليميراز الحمض النووي 0 هو شكل مُهندس وراثيًا من إنزيم بوليميراز الحمض النووي T7. على عكس الإنزيم الأصلي، يكاد يخلو من نشاط الإكسونوكلياز 3'→5'. سيكويناز الإصدار 2.
يتميز الإنزيم 0 بقدرة عالية على المعالجة، ويشمل نظائر النيوكليوتيدات (مثل dlTP، و thio-dNTPs، و dideoxy-NTPs، وغيرها)، ولا تعيقه البنى الثانوية، ويمكنه إجراء عملية تخليق إزاحة السلسلة. إنه إنزيم ممتاز لتسلسل الـ dideoxy، ومفيد في تطبيقات أخرى، خاصةً عندما يكون غياب نشاط الإكسونوكلياز المصاحب مرغوبًا فيه.
الإصدار الثاني من برنامج Sequenase.
يتكون البروتين 0 من وحدتين فرعيتين، إحداهما بروتين ثيوريدوكسين من بكتيريا الإشريكية القولونية (بوزن جزيئي 12000)، والأخرى نسخة معدلة وراثيًا من بروتين الجين 5 لفيروس العاثية T7 (بوزن جزيئي 76000). تؤدي التغييرات الجينية في هذه الوحدة الفرعية (حذف 28 حمضًا أمينيًا باستخدام الطفرات الموجهة في المختبر) إلى إزالة جميع أنشطة الإكسونوكلياز القابلة للقياس دون التأثير على نشاط بوليميراز الحمض النووي.
الخصائص: الوزن الجزيئي: يتكون من وحدتين فرعيتين، بروتين T7 المعدل من الجين 5 (76 كيلو دالتون) وثيوريدوكسين الإشريكية القولونية (12 كيلو دالتون) درجة الحموضة المثلى: 7.
5- درجة الحرارة المثلى: 37 درجة مئوية. متطلبات الكاتيون ثنائي التكافؤ: Mg2+، Mn2+. النقاء: أكثر من 95% نقاء كما تم تحديده بواسطة SDS-PAGE.
تم اختبارها للتأكد من خلوها من النيوكليازات الداخلية والخارجية ذات السلسلة المزدوجة والمفردة الملوثة.
محلول التخزين: فوسفات البوتاسيوم 20 ملي مولار (الأس الهيدروجيني 7).
4)، 1 ملي مولار DTT، 0.
1 مليمول من EDTA، 50% جلسرين.
شروط الفحص: يحتوي خليط التفاعل (100 ميكرولتر) على 40 ملي مولار من Tris-HCl (الأس الهيدروجيني 7).
5)، 10 ملي مولار MgCl2، 5 ملي مولار DTT، 0.
3 ملي مول من النيوكليوتيدات ثلاثية الفوسفات (dNTPs)، و5 ميكروغرام من M13mp18 المرتبط مسبقًا بـ 5 بيكومول من البادئ العالمي M13. يُضاف الإنزيم إلى مزيج التفاعل المُسخن مسبقًا (37 درجة مئوية)؛ ويُحضن المزيج عند 37 درجة مئوية لمدة دقيقة واحدة.
تعريف الوحدة: وحدة واحدة من الإنزيم تحفز دمج 1 نانومول من النيوكليوتيد في شكل غير قابل للذوبان في الحمض في 30 ثانية عند 37 درجة مئوية.
التركيز: 13 وحدة/ميكرولتر محلول تخفيف سيكويناز (1 مل مرفق، PN 70765): 10 ملي مولار Tris-HCl (الأس الهيدروجيني 7).
5)، 5 ملي مولار DTT، 0.
1 مليمول من الإيثيلين ديامين رباعي حمض الأسيتيك (EDTA).
المراجع: تابور، إس. وريتشاردسون، سي سي (1989) مجلة الكيمياء البيولوجية.
264، 6447-6458.
Wang, D., Coscoy, L., Zylberberg, M., Avila, PC, Boushey, HA, Ganem, D. and DeRisi, JL (2002)Proc Natl. أكاد. الخيال العلمي. الولايات المتحدة الأمريكية، 99، 15687-15692.
باريس، م. (1992) التعليقات 18، (رقم 3)، شركة الولايات المتحدة للكيمياء الحيوية، كليفلاند، أوهايو.
تابور، إس. وريتشاردسون، سي سي (1987) وقائع.
Natl. Acad Sci. USA84, 4767-4771.
تابور، إس. وريتشاردسون، سي سي (1989) وقائع.
الأكاديمية الوطنية للعلوم
USA86، 4076-4080.
التركيز: 13 وحدة/ميكرولتر
الوصف: سيكوينيز الإصدار 2.
0 بوليميراز الحمض النووي، 1000 وحدة، تركيز 13 وحدة/ميكرولتر، شكل معدل وراثيًا من بوليميراز الحمض النووي T7، 7.
درجة الحموضة المثلى 5، درجة الحرارة المثلى 37 درجة مئوية
للاستخدام مع (التطبيق): التسلسل
بوليميراز: شكل مُهندس وراثيًا من بوليميراز الحمض النووي T7
نوع المنتج: سيكوينيز الإصدار 2.
بوليميراز الحمض النووي 0
النقاء: 0.
95
الكمية: 1000 وحدة
حجم الوحدة: كل وحدة