نظام التجميع الجيني عالي الترتيب GeneArt™ من Thermo Fisher، A13285

نظام التجميع الجيني عالي الرتبة GeneArt™ هو مجموعة أدوات عالية الكفاءة للتجميع المتزامن والسلس لما يصل إلى 10 قطع من الحمض النووي، يصل طولها الإجمالي إلى 110 كيلو قاعدة، في أي ناقل. يعتمد النظام على قدرة الخميرة على امتصاص قطع الحمض النووي وإعادة تركيبها بكفاءة عالية. هذا يقلل بشكل كبير من التعامل مع الحمض النووي في المختبر، ويُغني عن المعالجات الإنزيمية، مثل التقييد والربط، مع السماح بدمج دقيق لتسلسلات الحمض النووي. تحتوي المجموعة على مواد لتحويل الحمض النووي وتنقيته من الخميرة (بدون وسط نمو)، وبكتيريا الإشريكية القولونية المؤهلة لتضخيم البلازميد للحصول على مستنسخات صحيحة.
• سهل وفعّال - استنسخ ما يصل إلى 10 قطع من الحمض النووي، بالتسلسل الذي تختاره، في وقت واحد في ناقل واحد (حتى 110 كيلو قاعدة)؛ لا حاجة إلى هضم التقييد أو الربط أو مواقع إعادة التركيب
• الدقة والكفاءة - مصممة لتمكينك من استنساخ ما تريد، أينما تريد، وبالاتجاه الذي تريده، وتحقيق نسخ صحيحة بنسبة تصل إلى 90% دون ترك أي تسلسلات إضافية.
• المرونة - استخدم ناقلنا الخطي، أو ناقلًا من اختيارك، أو استنسخ أجزاء الحمض النووي الموجودة مسبقًا والتي لا تحتوي على تماثل في النهاية دون إجراء تعديلات إضافية.
• أدوات مجانية — صمم سلاسل الحمض النووي (DNA oligos) وغيرها الكثير باستخدام واجهتنا المجانية على الإنترنت التي ترشدك خلال مشروعك خطوة بخطوة
• تطبيقات متنوعة — تبسيط العديد من تقنيات البيولوجيا التركيبية والبيولوجيا الجزيئية من خلال الجمع السريع لقطع الحمض النووي، أو إضافتها، أو حذفها، أو استبدالها. لاستنساخ من 1 إلى 4 قطع من الحمض النووي ذات حجم محدود، وإذا كنت تفضل نهجًا مخبريًا، فضع في اعتبارك استخدام مجموعة GeneArt® Seamless Cloning and Assembly Kit (رقم المنتج A13288). إنشاء تركيبات جديدة محددة بسهولة من قطع الحمض النووي المتنوعة. يستفيد نظام GeneArt® High-Order Genetic Assembly System من إعادة التركيب المرتبط بالتحويل (TAR) في خميرة Saccharomyces cerevisiae لربط قطع الحمض النووي الموجودة مسبقًا، أو قليل النوكليوتيدات المصنعة كيميائيًا، في جزيء معاد تركيبه واحد. يتم ربط قطع الحمض النووي والناقل الخطي بناءً على التماثل الطرفي المشترك. إذا لم يكن هناك تماثل طرفي بين القطع، فيمكن "خياطتها" معًا باستخدام روابط إعادة التركيب، وهي قليل النوكليوتيدات الاصطناعية التي توفر التماثل الطرفي بين قطعتين غير مرتبطتين من الحمض النووي. تتميز هذه العملية بالكفاءة العالية والسلاسة التامة، حيث لا تترك أي تسلسلات إضافية بعد التجميع. وعلى الرغم من إثبات فعاليتها مع ما يصل إلى 0.5 ميجابايت و50 قطعة من الحمض النووي، فقد تم تحسين هذا المنتج ليعمل مع ما يصل إلى 110 كيلوبايت و10 قطع من الحمض النووي في ناقل واحد. التحقق البسيط من الاستنساخ: لتقليل الجهد المبذول في الخميرة، تخضع مستنسخات الخميرة المُعاد تركيبها لبروتوكول استخلاص الحمض النووي المُبسط الذي يستغرق 10 دقائق. تُنتج خطوة الاستخلاص جزيئًا مُجمّعًا بكمية كافية لإجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) للتحقق من الوصلات، بالإضافة إلى التحويل المباشر لخلايا الإشريكية القولونية لإجراء التحليلات اللاحقة. يتضمن الطقم محلول التحلل الخاص وخرزات الزجاج اللازمة للاستخلاص. لاختيار مستنسخات الخميرة المُعاد تركيبها، نوفر طقم وسط استنبات الخميرة الانتقائي، CSM Media لخلايا الخميرة Mav203 (رقم المنتج: A13292). اعتبارات اختيار ناقل الاستنساخ: يتطلب نظام التجميع الجيني عالي الترتيب GeneArt® نواقل نقل ذات سعة عالية ومتوافقة مع الخميرة والإشريكية القولونية (مثل نواقل النقل BAC-YAC). لا يتضمن هذا المنتج ناقل استنساخ، ولكننا نوفر ناقل استنساخ خطي جاهز للاستخدام بشكل منفصل يُسمى GeneArt® pYES1L Vector بتقنية Sapphire™ (رقم المنتج A13287). يمكنك أيضًا استخدام ناقلك الخاص، ولكن يجب أن يكون متوافقًا مع نظام التجميع الجيني عالي الترتيب. يمكن تحقيق هذا التوافق بسهولة باستخدام كاسيت تحويل ناقل GeneArt® عالي الترتيب (رقم المنتج A13291). كفاءة الاستنساخ: في نظام التجميع عالي الترتيب GeneArt®، تتمثل العوامل الرئيسية المؤثرة على كفاءة الاستنساخ في حجم عناصر الحمض النووي، وعدد العناصر التي لا تحتوي على تماثل في النهايات، والحجم الإجمالي للجزيء النهائي، وجودة وخصوصية القطعة. لا يؤثر الطرف النهائي لقطع الحمض النووي المُستَخلَصة بتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل (سواءً كان طرفًا بارزًا أو طرفًا غير بارز) على كفاءة الاستنساخ. وفيما يلي كفاءات الاستنساخ النموذجية لأعداد مختلفة من القطع ذات التماثل النهائي المُجمَّعة في ناقل GeneArt® pYES1L بتقنية Sapphire™:
• >90% لخمس قطع من الحمض النووي بحجم 10 كيلوبايت لكل منها
• >90% لعشرة أجزاء من الحمض النووي بحجم 5 كيلوبايت لكل منها
• >50% لـ 10 قطع من الحمض النووي بحجم 10 كيلوبايت لكل منها. كفاءات الاستنساخ الشائعة للقطع الموجودة مسبقًا، بدون تماثل في النهاية، والمجمعة في ناقل GeneArt® pYES1L بتقنية Sapphire™ باستخدام قليل النوكليوتيدات DNA "المخيطة" هي:
• >90% لجزء واحد بحجم 10 كيلوبايت
• >75% لقطعتين من الحمض النووي بطول 10 كيلوبايت لكل منهما. صمم عملية الاستنساخ الخاصة بك حاسوبيًا. تُعد الخطوة الأساسية في نظام التجميع الجيني عالي الترتيب GeneArt® هي التصميم الصحيح للقطع والنيوكليوتيدات قليلة النوكليوتيدات مع التماثل والتباعد المناسبين لضمان نجاح تجميع المستنسخ. لتبسيط وتسريع عملية التصميم، نوفر أداة تصميم مجانية عبر الإنترنت لمساعدتك في تصميم تجربتك حاسوبيًا. تتحقق الأداة من توافق التصميم التجريبي مع مواصفات المنتج، وتصمم نيوكليوتيدات قليلة النوكليوتيدات إما لتضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) أو لربط العناصر المختلفة للاستنساخ، وتعرض للمستخدم تمثيلًا رسوميًا للناقل بالإضافة إلى تسلسل مُعَلَّق قابل للتنزيل بتنسيق GenBank متوافق مع برنامج Vector NTI®. التطبيقات: صُمم نظام التجميع الجيني عالي الترتيب GeneArt® لتمكين تجارب الاستنساخ وتجميع الحمض النووي في مجموعة واسعة من تطبيقات البيولوجيا الجزيئية والبيولوجيا التركيبية، من بين تطبيقات أخرى. يُتيح هذا المنتج إنشاء نواقل تعبيرية معيارية، بأجزاء قابلة للتبديل، ويمكن استخدامه لأداء مجموعة متنوعة من المهام التي تتطلب عادةً خطوات متعددة. استخدم هذه المجموعة ببساطة لـ: بناء بروتينات اندماجية، حذف أو استبدال أو إضافة عناصر الحمض النووي مثل مواقع التقييد، استنساخ أجزاء كبيرة من الحمض النووي موجودة مسبقًا بدون تماثل في النهايات، والعديد من التقنيات الأخرى التي تتطلب معالجة التسلسلات الجينية. سلالة بكتيرية أو خميرة: MaV203، TOP10
طريقة الاستنساخ: الاستنساخ السلس
الوصف: نظام التجميع الجيني عالي الترتيب من GeneArt
للاستخدام مع (التطبيق): الاستنساخ
عدد الأجزاء: حتى 10 أجزاء
خط الإنتاج: GeneArt™
نوع المنتج: مجموعة نظام التجميع الجيني
الكمية: 10 تفاعلات
نوع العينة: الحمض النووي
الحجم: 110 كيلوبايت إجمالاً (ملف متجه بالإضافة إلى جميع الإضافات)
خطوة سير العمل: تجميع الحمض النووي
التنسيق: مجموعة
حجم الوحدة: كل وحدة