Thermo Fisher، A29378، GeneArt™ CRISPR Nuclease mRNA

تم تصنيع mRNA الخاص بإنزيم CRISPR من GeneArt™ باستخدام عملية تصنيع جديدة لتحقيق جودة فائقة وأداء مُحسّن للمنتج. يحتوي mRNA الخاص ببروتين Cas9 من النوع البري على إشارتين لتحديد الموقع النووي (NLS). وقد أظهرت الدراسات أن تركيبات Cas9 التي تحتوي على إشارتين لتحديد الموقع النووي أكثر كفاءة في توجيه بروتين Cas9 إلى النواة (1). يُعدّ mRNA جاهزًا للنقل، مما يُغني عن خطوات الاستنساخ المُستهلكة للوقت واللازمة عند استخدام أنظمة ناقلات CRISPR. يتم نقل mRNA الخاص ببروتين Cas9 مع RNA مُوجّه مُحدد للهدف (gRNA) لتوجيه بروتين Cas9 إلى الموقع الجيني المُستهدف لإحداث قطع مزدوج السلسلة. يتميز mRNA الكامل بحمولة أصغر من أنظمة Cas9 القائمة على البلازميد، مما يُحسّن توصيله إلى الخلية وكفاءة تحرير الجينوم. بالإضافة إلى ذلك، يُمكن استخدام mRNA الخاص ببروتين Cas9 في مناهج متعددة مع أكثر من gRNA واحد. استخدم هذا النهج لتحديد تسلسل gRNA الذي يعمل بشكل أفضل لهدف معين أو لتحرير مواقع جينومية متعددة بعملية نقل واحدة.
كيفية الحصول على تسلسل الحمض النووي الريبوزي المرشد (gRNA): تتطلب عملية تحرير الجينوم باستخدام تقنية كريسبر وجود حمض نووي ريبوزي مرشد غير مشفر (gRNA) لقطع الحمض النووي الجينومي عند تسلسل مستهدف. يتكون الحمض النووي الريبوزي المرشد من مكونين جزيئيين: حمض نووي ريبوزي كريسبر خاص بالهدف (crRNA) وحمض نووي ريبوزي كريسبر منشط (tracrRNA)، وقد دُمجا في نسخة واحدة. يجب أن يكون التسلسل المستهدف (20 قاعدة) مباشرةً قبل وحدة PAM (NGG) التي تسمح لإنزيم Cas9 ببدء الارتباط. توجد وحدة PAM فقط على الحمض النووي المستهدف وليست جزءًا من تسلسل كريسبر الخاص بالهدف. يوجه كل من الحمض النووي الريبوزي المرشد ووحدة PAM إنزيم Cas9 إلى التسلسل الجينومي المستهدف لتكوين مركب وإحداث قطع مزدوج السلسلة غير لاصق (DSB) على بعد ثلاث نيوكليوتيدات قبل موقع PAM.
استخدم أداة GeneArt للبحث والتصميم في تقنية CRISPR للبحث في قاعدة بياناتنا التي تضم أكثر من 600,000 تسلسل gRNA خاص بكل جين في جينومات الإنسان والفأر. تم تصميم gRNAs مسبقًا من GeneArt خصيصًا لتعطيل الجينات، وتستهدف عادةً الإكسونات الثلاثة الأولى المنسوخة لكل جين. تتضمن نتائج البحث توصيات مبنية على تقليل التأثيرات الجانبية المحتملة، ومواقع الارتباط المحتملة، وخرائط الإكسونات مع مواقع gRNA. يمكن أيضًا استخدام هذه الأداة لتحليل أي تسلسل ذي أهمية لتصميم تسلسلات CRISPR فريدة.
كيفية صنع gRNA: بمجرد اختيار تسلسلات gRNA، اختر من بين ثلاثة خيارات لصنع gRNA: 1. مجموعة GeneArt Precision gRNA Synthesis Kit للحصول على gRNA جاهز للنقل في أقل من أربع ساعات بما في ذلك تجميع القالب.
2. GeneArt CRISPR Strings، وهو قالب DNA اصطناعي يتكون من gRNA مع محفز T7 للنسخ في المختبر أو محفز U6 لتنسيق جاهز للنقل، والذي يمكن شراؤه عبر أداة البحث والتصميم GeneArt CRISPR أو عن طريق ملء نموذج طلب DNA GeneArt CRISPR Strings وإرساله إلى GeneArtSupport@lifetech.
com.
3. وفّر وقتك وجهدك، ودع فريق خدمات GeneArt المُخصصة يُصمّم ويُركّب ويُنقّي تسلسلات gRNA المُستنسخة في المختبر (IVT) نيابةً عنك. للحصول على عرض أسعار أو لتقديم طلب، يُرجى التواصل مع قسم الخدمات المُخصصة على الرقم 1-800-955-6288 تحويلة 45682 أو عبر البريد الإلكتروني custom.
services@lifetech.
com.
الموارد: البروتوكول الموضح: هندسة الخلايا الجذعية باستخدام CRISPR-Cas9 المراجع 1.
كونغ إل، ران إف إيه، كوكس دي، لين إس، باريتو آر، حبيب إن، هسو بي دي، وو إكس، جيانغ دبليو، مارافيني إل إيه، تشانغ إف. (2013) هندسة الجينوم المتعددة باستخدام أنظمة CRISPR/Cas. ساينس 339(6121):819-23.
نوع المنتج النهائي: الحمض النووي الريبي (RNA)
خط الإنتاج: GeneArt™
نوع المنتج: نوكلياز كريسبر mRNA
الكمية: 15 ميكروغرام
شروط الشحن: ثلج جاف
الحجم (متري): 15 ميكروغرام
التنسيق: أنبوب
حجم الوحدة: كل وحدة