Thermo Fisher، A35379، مجموعة SYBR™ Green Fast Advanced Cells-to-CT™

٤٠ تفاعلًا، ٢٢ ميكرولتر من إنزيم DNase I. مجموعة SYBR Green Fast Advanced Cells-to-Ct هي نظام متكامل لتحليل مستخلصات الخلايا، مصمم لتحليل التعبير الجيني مباشرةً من الخلايا المستنبتة دون الحاجة إلى تنقية الحمض النووي الريبوزي (RNA). تأتي كواشف تحليل الخلايا SYBR Green Fast Advanced Cells-to-Ct مزودة بمزيج إنزيم النسخ العكسي Cells-to-Ct Fast Advanced عالي الحساسية، ومحلول منظم RT بتركيز ٢X، ومزيج PowerUp SYBR Green Master عالي الجودة. تمنحك مجموعة SYBR Green Fast Advanced Cells-to-Ct الحساسية التي تحتاجها بأسرع سير عمل متاح: احصل على نتائج تحليل التعبير الجيني من طبق كامل من الخلايا في غضون دقيقة واحدة تقريبًا.
5 ساعات.
تتضمن هذه الطريقة المتكاملة والمحسّنة سير عمل يشمل كواشف تحلل الخلايا مع إزالة الحمض النووي الجينومي، ومزيج إنزيم النسخ العكسي المتقدم السريع الجديد، ومحلول منظم، ومزيج PowerUp SYBR Green Fast Advanced Master Mix الجديد. تتميز هذه الطريقة بالسرعة - تحضير العينة في 7 دقائق، بما في ذلك معالجة DNase، في درجة حرارة الغرفة. كما أنها سهلة الاستخدام - حيث يمكن تحلل العينات في أنبوب أو مباشرة في أطباق الاستزراع. وتتميز أيضًا بالكفاءة - حيث يمكن إجراء تحليل التعبير الجيني على 10-100,000 خلية لكل عينة؛ وتكون النتائج مماثلة لتلك الناتجة عن الحمض النووي الريبي النقي. كما أنها فعالة - حيث تحتوي على كمية كافية من الكواشف لتوليد 1000 نتيجة تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي من 100 عينة ابتدائية. وتلغي هذه الطريقة الفريدة الحاجة إلى عزل الحمض النووي الريبي من الخلايا المستزرعة. تتميز طريقة Cells-to-Ct بكاشف تحلل فريد يقوم بتحليل الخلايا وحماية الحمض النووي الريبي. وتحدث إزالة الحمض النووي في نفس الوقت في خطوة التحلل التي تستغرق 5 دقائق لتوفير الوقت وتحسين سهولة الاستخدام. ثم يتم إيقاف التحلل بإضافة "محلول إيقاف" يرتبط بشكل لا رجعة فيه بكواشف التحلل.
تحتوي مجموعة SYBR Green Fast Advanced Cells-to-CT على كواشف النسخ العكسي Cells-to-Ct Fast Advanced لتخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) ومزيج PowerUp SYBR Green Master Mix لتحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (PCR). ويُوفر المستخدم مجموعات البادئات.
تحضير بسيط للعينات في 7 دقائق فقط. صُممت مجموعة SYBR Green Fast Advanced Cells-to-CT لتحضير ما بين 10,000 و100,000 خلية مُستزرعة لكل عينة. تُغسل الخلايا بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) وتُحلل في محلول التحلل لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة؛ ويمكن إجراء معالجة DNase في الوقت نفسه. يُوقف التحلل في درجة حرارة الغرفة بحضانة لمدة دقيقتين مع محلول الإيقاف. تصبح المُستخلصات جاهزة الآن للنسخ العكسي أو التخزين عند -20 درجة مئوية لفترة قصيرة أو -80 درجة مئوية لفترة طويلة.
لتحقيق أقصى حساسية للكشف، على عكس بعض مجموعات المنافسين التي تحد من كمية المستخلص الخلوي في تفاعل النسخ العكسي إلى 10%، يمكن لمجموعة SYBR Green Fast Advanced Cells-to-CT استيعاب 45% من إجمالي حجم تفاعل النسخ العكسي كمستخلص خلوي. بالإضافة إلى ذلك، يمكن أن يشكل الحمض النووي التكميلي (cDNA) ما يصل إلى 30% من حجم تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR). يؤدي حجم المستخلص الخلوي الكبير في تفاعل النسخ العكسي المُحسَّن، إلى جانب حجم الحمض النووي التكميلي الكبير في تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي اللاحق باستخدام مزيج PowerUP SYBR Green Master Mix، إلى أقصى حساسية. يعمل المزيج الرئيسي على تضخيم الهدف بدقة متناهية، مما يُمكّن من الكشف عن كميات صغيرة من الهدف، مثل النسخ المُعبَّر عنها بمستويات منخفضة.
تقليل فقدان العينات وأخطاء النقل: نظرًا لإمكانية معالجة العينات مباشرةً في آبار الاستزراع (96 أو 384 بئرًا)، يتم تقليل التعامل مع العينات واحتمالية فقدانها أو أخطاء نقلها إلى أدنى حد، مما يُسهّل المعالجة السريعة وعالية الإنتاجية. على عكس بروتوكولات عزل الحمض النووي الريبوزي (RNA) التقليدية متعددة الخطوات، لا تتطلب هذه المجموعة أي خطوات تسخين أو غسل أو طرد مركزي. فهي تُبسّط عمليةً شاقةً تستغرق من 30 إلى 60 دقيقة، وتُقلّصها إلى 7 دقائق فقط.
أداءٌ مُثبت، مُثبتٌ معًا. تم تحسين جميع مكونات مجموعة SYBR Green Fast Advanced Cells-to-CT لضمان أداءٍ ثابتٍ وموثوق. هذا يُغنيك عن التخمين المُصاحب لتجميع مجموعات تحضير العينات، والتفاعل العكسي، وتفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي بشكلٍ منفصل، مما يمنحك الحساسية التي تحتاجها في أسرع سير عمل مُتاح من العينة إلى النتيجة.
التركيز: ضعف
ديوكسي ريبونيوكلياز: 22 ميكرولتر من ديوكسي ريبونيوكلياز I
الدقة (مقارنة بـ Taq): ضعف
التنسيق: أنبوب
الميزات الصديقة للبيئة: استخدام موارد أقل ونفايات أقل، مخاطر أقل
التوافق مع الإنتاجية العالية: متوافق مع الإنتاجية العالية
عدد التفاعلات: 40 تفاعلاً
خط الإنتاج: Cells-to-CT™
نوع المنتج: مجموعة تحويل الخلايا المتقدمة السريعة إلى خلايا CT
هدف التنقية: مستخلص الخلايا
الكمية: 40 تفاعلاً
نوع الكاشف: تحلل الخلايا
نوع العينة: خلايا ثديية
شروط الشحن: ثلج جاف
المواد الأولية: 10-100000 خلية
يكفي لـ: 40 تفاعلًا
طريقة الكشف: SYBR
للاستخدام مع (التطبيق): التعبير الجيني
أداء تفاعل البوليميراز المتسلسل الغني بالـ GC: عالٍ
طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل: تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي العكسي على مرحلتين
سرعة رد الفعل: 7 دقائق
حجم الوحدة: كل وحدة