Thermo Fisher، AM1728، مجموعة TaqMan™ للتعبير الجيني من الخلايا إلى CT™

تتيح مجموعة TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™ إجراء تحليل التعبير الجيني مباشرةً من الخلايا المستنبتة دون الحاجة إلى تنقية الحمض النووي الريبوزي (RNA). توفر هذه المجموعة الوقت وتتميز بسير عمل بسيط يناسب عددًا قليلًا من العينات، كما يمكن دمجها بسهولة في تطبيقات آلية عالية الإنتاجية.
مجموعة TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CTKit هي:
• سير عمل كامل ومُحسَّن يتضمن كواشف تحلل الخلايا مع إزالة الحمض النووي الجينومي، ومزيج إنزيم النسخ العكسي، والمحلول المنظم، ومزيج TaqMan™ Gene Expression Master Mix الجديد
• سريع - تحضير العينة في 7 دقائق، بما في ذلك المعالجة بالديوكسي ريبونيوكلياز، في درجة حرارة الغرفة
• سهل - قم بتحليل العينات في أنبوب أو مباشرة في أطباق الاستنبات
• قوي - يُجري تحليل التعبير الجيني على 10-100000 خلية لكل عينة؛ نتائج مكافئة لتلك المُستخلصة من الحمض النووي الريبي النقي
• فعال - يحتوي على كمية كافية من الكواشف لإنتاج 500 نتيجة تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (PCR) من 100 عينة أولية. يتميز طقم TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™ بطريقة فريدة لتحليل الخلايا المستنبتة مع إزالة الحمض النووي الجينومي والحفاظ على سلامة الحمض النووي الريبوزي (RNA). يحتوي الطقم على كواشف النسخ العكسي (RT) لتخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) ومزيج TaqMan™ Gene Expression Master Mix لتحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (PCR). تُباع مجموعات بادئات/مجسات TaqMan™ بشكل منفصل.
تحضير بسيط للعينات في 7 دقائق: جزء من سير عمل متكامل. سواء كنت تستخدم أطباقًا أو أنابيب، فإن مجموعة TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™، التي تستخدم إجراء تحضير العينات البسيط الموضح في الشكل (7 دقائق)، مصممة لـ 10-100,000 خلية مزروعة لكل عينة. تُغسل الخلايا بمحلول PBS وتُحلل في المحلول لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة؛ ويمكن إجراء معالجة DNase في الوقت نفسه. يُوقف التحلل في درجة حرارة الغرفة بحضانة لمدة دقيقتين مع محلول الإيقاف. تصبح المستخلصات جاهزة الآن للنسخ العكسي أو التخزين عند -20 درجة مئوية. نظرًا لإمكانية معالجة العينات مباشرةً في آبار الزراعة (96 أو 384 بئرًا)، يتم تقليل التعامل مع العينات واحتمالية فقدانها أو حدوث خطأ في نقلها، مما يُسهل المعالجة السريعة وعالية الإنتاجية. على عكس بروتوكولات عزل الحمض النووي الريبوزي (RNA) التقليدية متعددة الخطوات، لا تتطلب هذه المجموعة أي خطوات تسخين أو غسل أو طرد مركزي. تعمل هذه المجموعة على تبسيط عملية شاقة تستغرق من 30 إلى 60 دقيقة بشكل كبير وتقليصها إلى 7 دقائق.
تتيح آلية عمل مجموعة TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™ تقييمًا فائقًا للتعبير الجيني باستخدام أي من أكثر من 700,000 اختبار TaqMan™ Gene Expression. وقد خضعت هذه المجموعة لاختبارات مكثفة للتأكد من دقتها باستخدام مجموعة واسعة من اختبارات TaqMan™ Gene Expression، وأظهرت أداءً مماثلاً للأداء الذي تم الحصول عليه باستخدام الحمض النووي الريبي النقي (انظر الشكل).
حقق أداءً وحساسيةً لا مثيل لهما. على عكس بعض مجموعات المنافسين التي تحد من كمية المستخلص الخلوي في تفاعل النسخ العكسي إلى 5%، تستوعب مجموعة TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™ ما يصل إلى 45% من إجمالي حجم تفاعل النسخ العكسي كمستخلص خلوي. بالإضافة إلى ذلك، يمكن أن يشكل الحمض النووي التكميلي (cDNA) ما يصل إلى 45% من حجم تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (PCR). يؤدي حجم المستخلص الخلوي الكبير في تفاعل النسخ العكسي المُحسَّن، إلى جانب حجم الحمض النووي التكميلي الكبير في تفاعل PCR الكمي اللاحق باستخدام مزيج TaqMan™ Gene Expression Master Mix، إلى أقصى حساسية. يُضخِّم المزيج الرئيسي الهدف بدقة متناهية، مما يُمكِّن من الكشف عن كميات صغيرة من الهدف، مثل النسخ المُعبَّر عنها بمستويات منخفضة.
تم اختبار قدرة الكشف عن كميات محدودة من الهدف عن طريق مزج عدد ثابت من الخلايا البشرية مع أعداد مختلفة من خلايا الفئران. حُضِّرت مخاليط الخلايا باستخدام مجموعة TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™، وخضعت للتحليل للكشف عن جين خاص بالفئران وآخر خاص بالبشر. جُمعت بيانات مقارنة بنفس الطريقة باستخدام الحمض النووي الريبوزي (RNA) المُنقّى بالطرق التقليدية. تُظهر البيانات إمكانية الكشف عن الحمض النووي الريبوزي من 10 خلايا فئران فقط في خلفية من الحمض النووي الريبوزي من 10000 خلية بشرية (انظر الشكل). كانت قدرة مجموعة TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™ على الكشف عن النسخ ذات الوفرة المنخفضة نسبيًا مُكافئة لقدرة الحمض النووي الريبوزي المُنقّى؛ بل كانت أفضل منه عند المستويات المنخفضة.
بالإضافة إلى ذلك، قورن أداء مجموعة TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™ Kit مع مجموعات التحلل الخلوي المنافسة ومع الحمض النووي الريبي النقي. وتم فحص مدخلات تتراوح بين 100 و100,000 خلية لكل تفاعل تحلل. وكانت حساسية بروتوكول مجموعة TaqMan™ Cells-to-CT™ Kit مماثلة لتلك التي تم الحصول عليها باستخدام الحمض النووي الريبي النقي، وتفوقت على مستخلصات الخلايا المنافسة (انظر الشكل). علاوة على ذلك، يُظهر غياب التثبيط عند المدخلات الخلوية العالية وانخفاض التباين بين التكرارات التقنية موثوقية هذا النهج لدراسات التعبير الجيني باستخدام الخلايا المستنبتة.
أداءٌ مُثبت، مُثبتٌ معًا. تم تحسين جميع مكونات مجموعة TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™ لضمان أداءٍ ثابتٍ وموثوق. هذا يُغني عن التخمين المُصاحب لتجميع مجموعات تحضير العينات، والنسخ العكسي، والتفاعل التسلسلي للبوليميراز في الوقت الحقيقي بشكلٍ منفصل. كما تم التحقق من صحة مجموعة TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™ باستخدام فحوصات TaqMan™ Gene Expression لضمان جودةٍ إضافية.
منتج إضافي: صُممت مجموعة TaqMan™ Cells-to-CT™ Control Kit للاستخدام مع مجموعة TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™ Kit. تحتوي هذه المجموعة على عنصر تحكم داخلي (ACTB) لمعايرة تباين تحميل العينات، وعنصر تحكم اصطناعي XenoRNA™، بالإضافة إلى اختبار TaqMan™ Gene Expression Assay المقابل لمراقبة تأثيرات تثبيط تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR).
للاستخدام مع (الأجهزة): نظام 7000، نظام 7300، نظام 7500، نظام 7900HT، نظام Applied Biosystems StepOnePlus™ Fast Real-Time PCR، StepOne™، الوضع القياسي، StepOnePlus™، الوضع القياسي، أنظمة QuantStudio 6 و7 Pro، نظام QuantStudio 7 Flex، أنظمة QuantStudio 3 و5، نظام QuantStudio 12k Flex، نظام QuantStudio 6 Flex
التنسيق: أنبوب
الميزات الصديقة للبيئة: استخدام موارد أقل ونفايات أقل، مخاطر أقل
عدد التفاعلات: 100 تفاعل
صبغة مرجعية سلبية: ROX (مخلوطة مسبقًا)
بوليميراز: بوليميراز الحمض النووي
خط الإنتاج: Ambion™، Cells-to-CT™، TaqMan™
نوع المنتج: مجموعة التعبير الجيني من الخلايا إلى الخلايا
درجة النقاء أو الجودة: UP (نقي للغاية)
الكمية: 100 تفاعل
نوع الكاشف: تحلل الخلايا
إنزيم النسخ العكسي: M-MLV
نوع العينة: خلية
شروط الشحن: ثلج جاف
يكفي لـ: 100 تفاعل
طريقة الكشف: البادئ والمسبار
أداء تفاعل البوليميراز المتسلسل الغني بالـ GC: عالٍ
طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل: تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي العكسي على مرحلتين
سرعة رد الفعل: قياسية
حجم الوحدة: كل وحدة