Thermo Fisher، C10645، Click-iT™ Plus EdU Alexa Fluor™ 350 Flow Cytometry Assay Kit

Thermo Fisher، C10645، Click-iT™ Plus EdU Alexa Fluor™ 350، طقم تحليل التدفق الخلوي. يوفر طقم Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 350 تحليلًا مبسطًا وأكثر دقة لتحليل تضاعف الحمض النووي في الخلايا المتكاثرة مقارنةً بطرق BrdU التقليدية. يتم تحليل الحمض النووي المُصنّع حديثًا باستخدام ليزر الأشعة فوق البنفسجية لجهاز قياس التدفق الخلوي. تركيبة Click-iT Plus متوافقة مع الفلوروفورات القياسية، بما في ذلك R-PE وR-PE المزدوج، بالإضافة إلى البروتينات الفلورية.
قابل للتعدد - متوافق مع R-PE (والوحدات المزدوجة) والبروتينات الفلورية. دقيق - نتائج فائقة مقارنةً باختبارات BrdU. سريع - تظهر النتائج في غضون 60 دقيقة فقط. يمكن استخدام اختبارات Click-iT Plus Alexa Fluor 350 EdU مع R-PE ووحدات R-PE المزدوجة، بالإضافة إلى البروتينات الفلورية مثل GFP وmCherry. يتم تحفيز كاشف الوسم Alexa Fluor 350 بسهولة عند 350 نانومتر باستخدام ليزر فوق بنفسجي، ويصدر ضوءًا عند 438 نانومتر.
طريقة متطورة تُعطي نتائج أفضل من BrdU: تُعدّ القياسات المباشرة لتخليق الحمض النووي (DNA) الطريقة الأكثر دقة لتحليل تكاثر الخلايا. في الأصل، كان يتم ذلك من خلال دمج النيوكليوسيدات المشعة. ثم استُبدلت هذه الطريقة بالكشف القائم على الأجسام المضادة عن نظير النيوكليوسيد بروموديوكسي يوريدين (BrdU). يُعدّ اختبار Click-iT Plus EdU Flow Cytometry بديلاً مبتكرًا لاختبار BrdU. EdU (5-إيثينيل-2'-ديوكسي يوريدين) هو نظير للثيميدين يُدمج في الحمض النووي أثناء تخليق الحمض النووي النشط. يعتمد الكشف على كيمياء النقر، وهي تفاعل تساهمي مُحفّز بالنحاس بين أزيد وألكاين. في هذا التطبيق، يوجد الألكاين في جزء الإيثينيل من EdU، بينما يرتبط الأزيد بصبغة أليكسا فلور. تُستخدم طرق قياس التدفق الخلوي القياسية لتحديد نسبة خلايا الطور S في المجموعة.
تتيح الظروف المعتدلة استخدام صبغة دورة الخلية والأجسام المضادة. يسمح الحجم الصغير لصبغة الأزيد بالكشف الفعال عن EdU المدمج باستخدام ظروف معتدلة، بينما يكفي التثبيت القياسي القائم على الألدهيد ونفاذية المنظفات لكي يصل كاشف Click-iT Plus إلى الحمض النووي. وهذا على عكس فحوصات BrdU التي تتطلب تمسخ الحمض النووي (باستخدام حمض الهيدروكلوريك أو الحرارة أو الهضم باستخدام DNase) لكشف BrdU حتى يمكن الكشف عنه باستخدام جسم مضاد لـ BrdU. قد تؤدي معالجة العينة لفحص BrdU إلى تغيير إشارة توزيع دورة الخلية، بالإضافة إلى تدمير مواقع التعرف على المستضد عند استخدام طريقة حمض الهيدروكلوريك. في المقابل، يتوافق فحص Click-iT Plus EdU سهل الاستخدام مع صبغات دورة الخلية. يمكن أيضًا إجراء اختبار Click-iT Plus EdU متعددًا مع الأجسام المضادة ضد العلامات السطحية والداخلية، بالإضافة إلى المركبات الموسومة بالفلوروفورات القياسية بما في ذلك R-PE، وR-PE tandems، والبروتينات الفلورية (GFP وmCherry).
بروتوكول سريع وسهل: يعتمد بروتوكول Click-iT Plus EdU على خطوات التثبيت بالألدهيد ونفاذية المنظفات لوسم الأجسام المضادة المناعية النسيجية. ومع ذلك، يتوافق EdU مع عوامل التثبيت/النفاذية الأخرى، بما في ذلك الصابونين والميثانول. في خمس خطوات فقط، ستكون جاهزًا لتحليل بيانات تكاثر الخلايا: عالج الخلايا بـ EdU، ثبّت الخلايا واجعلها نفاذة، اكشف عن خلايا الطور S باستخدام مزيج الكشف Click-iT Plus لمدة 30 دقيقة.
اغسل مرة واحدة. يمكن رؤية نتائج التحليل في غضون 60 دقيقة فقط في بعض الحالات، لكننا نوصي بـ 90 دقيقة لجميع التطبيقات.
التنسيق: مجموعة
الكمية: 50 اختبارًا
شروط الشحن: درجة حرارة الغرفة
الانبعاثات: 350/438
للاستخدام مع (المعدات): جهاز قياس التدفق الخلوي
خط الإنتاج: أليكسا فلور، كليك-آي تي
نوع المنتج: كاشف
حجم الوحدة: كل وحدة