Thermo Fisher، C10646، Click-iT™ Plus EdU Alexa Fluor™ 594 Flow Cytometry Assay Kit

Thermo Fisher، C10646، Click-iT™ Plus EdU Alexa Fluor™ 594، طقم تحليل التدفق الخلوي. يوفر طقم Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 594 تحليلًا مبسطًا وأكثر دقة لتحليل تضاعف الحمض النووي في الخلايا المتكاثرة مقارنةً بطرق BrdU التقليدية. يتم تحليل الحمض النووي المُصنّع حديثًا باستخدام ليزر 532 أو 561 نانومتر الخاص بجهاز قياس التدفق الخلوي. تركيبة Click-iT Plus متوافقة مع الفلوروفورات القياسية، بما في ذلك R-PE وR-PE المزدوج، بالإضافة إلى البروتينات الفلورية.
• قابل للتعدد - متوافق مع R-PE (والثنائيات) والبروتينات الفلورية
• دقيق - نتائج فائقة مقارنة باختبارات BrdU
• سريع - تظهر النتائج في أقل من 60 دقيقة. اطلع على دليل الاختيار لجميع فحوصات Click-iT EdU و Click-iT Plus EdU لقياس التدفق الخلوي.
يمكن استخدام فحوصات MultiplexableClick-iT Plus Alexa Fluor 594 EdU بالتزامن مع R-PE وR-PE tandems، بالإضافة إلى البروتينات الفلورية مثل GFP وmCherry. يتم تحفيز كاشف الوسم Alexa Fluor 594 بسهولة عند 532 أو 561 نانومتر، ويصدر ضوءًا عند 615 نانومتر.
طريقة متطورة تُعطي نتائج أفضل من BrdU: تُعدّ القياسات المباشرة لتخليق الحمض النووي (DNA) الطريقة الأكثر دقة لتحليل تكاثر الخلايا. في الأصل، كان يتم ذلك من خلال دمج النيوكليوسيدات المشعة. ثم استُبدلت هذه الطريقة بالكشف القائم على الأجسام المضادة عن نظير النيوكليوسيد بروموديوكسي يوريدين (BrdU). يُعدّ اختبار Click-iT Plus EdU Flow Cytometry بديلاً مبتكرًا لاختبار BrdU. EdU (5-إيثينيل-2'-ديوكسي يوريدين) هو نظير للثيميدين يُدمج في الحمض النووي أثناء تخليق الحمض النووي النشط. يعتمد الكشف على كيمياء النقر، وهي تفاعل تساهمي مُحفّز بالنحاس بين أزيد وألكاين. في هذا التطبيق، يوجد الألكاين في جزء الإيثينيل من EdU، بينما يرتبط الأزيد بصبغة أليكسا فلور. تُستخدم طرق قياس التدفق الخلوي القياسية لتحديد نسبة خلايا الطور S في المجموعة.
تتيح الظروف المعتدلة استخدام صبغة دورة الخلية والأجسام المضادة. يسمح الحجم الصغير لصبغة الأزيد بالكشف الفعال عن EdU المدمج باستخدام ظروف معتدلة، بينما يكفي التثبيت القياسي القائم على الألدهيد ونفاذية المنظفات لكي يصل كاشف Click-iT Plus إلى الحمض النووي. وهذا على عكس فحوصات BrdU التي تتطلب تمسخ الحمض النووي (باستخدام حمض الهيدروكلوريك أو الحرارة أو الهضم باستخدام DNase) لكشف BrdU حتى يمكن الكشف عنه باستخدام جسم مضاد لـ BrdU. قد تؤدي معالجة العينة لفحص BrdU إلى تغيير إشارة توزيع دورة الخلية، بالإضافة إلى تدمير مواقع التعرف على المستضد عند استخدام طريقة حمض الهيدروكلوريك. في المقابل، يتوافق فحص Click-iT Plus EdU سهل الاستخدام مع صبغات دورة الخلية. يمكن أيضًا إجراء اختبار Click-iT Plus EdU متعددًا مع الأجسام المضادة ضد العلامات السطحية والداخلية، بالإضافة إلى المركبات الموسومة بالفلوروفورات القياسية بما في ذلك R-PE، وR-PE tandems، والبروتينات الفلورية (GFP وmCherry).
بروتوكول سريع وبسيط: يعتمد بروتوكول Click-iT Plus EdU على خطوات تثبيت الألدهيد ونفاذية المنظفات لوسم الأجسام المضادة المناعية النسيجية. ومع ذلك، فإن EdU متوافق مع عوامل التثبيت/النفاذية الأخرى، بما في ذلك الصابونين والميثانول. في خمس خطوات فقط، ستكون جاهزًا لتحليل بيانات تكاثر الخلايا: 1. عالج الخلايا باستخدام EdU.
2. تثبيت الخلايا وزيادة نفاذيتها.
3. الكشف عن خلايا طور S باستخدام مزيج الكشف Click-iT Plus لمدة 30 دقيقة.
4. اغسل مرة واحدة.
5. التحليل.
يمكن ملاحظة النتائج في غضون 60 دقيقة فقط في بعض الحالات، ولكننا نوصي بـ 90 دقيقة لجميع التطبيقات.
الإثارة/الانبعاث: 532 أو 561/615
خط الإنتاج: أليكسا فلور™، كليك-آي تي™
شروط الشحن: درجة حرارة الغرفة
الكمية: 50 اختبارًا
حجم الوحدة: كل وحدة