Thermo Fisher، K174001، مجموعة EasySelect™ Pichia Expression Kit

مجموعة EasySelect™ للتعبير الجيني في خميرة Pichia: توفر مجموعة EasySelect™ للتعبير الجيني في خميرة Pichia pastoris جميع المكونات اللازمة لإنتاج البروتين. تحتوي المجموعة على سلالات خميرة Pichia، ونواقل التعبير الجيني، والكواشف التي تُمكّن من تحويل خلايا Pichia. يُسهّل الانتقاء باستخدام المضاد الحيوي Zeocin™ عملية فحص المتغيرات المُحوّلة ذات العدد الكبير من النسخ. مزايا نظام التعبير الجيني في Pichia pastoris: زراعة خلايا Pichia بسهولة زراعة بكتيريا الإشريكية القولونية، الحصول على كثافة خلوية أعلى من أنظمة التعبير الجيني الميكروبية الأخرى، إنتاج كمية أكبر من البروتين لكل خلية مقارنةً بأنظمة التعبير الجيني الميكروبية الأخرى، الاستفادة من معالجة البروتين في حقيقيات النوى، وطَيّ البروتين، والتعديلات ما بعد الترجمة، سهولة التوسع من قوارير الرج إلى التخمير على نطاق صناعي. نظام مُثبت لإنتاج البروتينات: على مدار الثلاثين عامًا الماضية، استُخدمت خميرة بيكيا باستوري في المختبرات والصناعات حول العالم لإنتاج مئات البروتينات المختلفة من أنواع عديدة، بما في ذلك الإنسان (المراجع 1، 2، 3). يمكن زراعة بيكيا باستوري بسهولة مثل البكتيريا (الإشريكية القولونية) أو الخميرة (الخميرة الجعوية)، ومع ذلك فهي توفر العديد من المزايا مقارنةً بتلك الأنظمة (المرجع 4). يمكن لبيكيا باستوري أن تنمو بكثافة خلوية أعلى بكثير من البكتيريا أو أنواع الخميرة الأخرى. كما أنها قادرة على النمو باستخدام الميثانول كمصدر وحيد للكربون، مما يجعل التوسع إلى المستويات الصناعية غير مكلف نسبيًا. قوة مُحفز AOX1: تستخدم مجموعة EasySelect™PichiaExpression Kit مُحفز جين أوكسيداز الكحول 1 (AOX1) الخاص ببيكيا باستوري لتحفيز إنتاج البروتين. عند زراعة فطر البيشيا باستيا على الميثانول كمصدر وحيد للكربون، يُمثل mRNA الخاص بإنزيم AOX1 ما يصل إلى 5% من إجمالي mRNA، وقد تصل نسبة إنزيم AOX1 إلى 30% من وزن الخلية (المرجع 5). يأتي نظام EasySelect™PichiaExpression مزودًا بناقلات pPICZ وpPICZα. تحتوي هذه الناقلات على موقع استنساخ متعدد (MCS) يسمح بإدخال الجين المطلوب تحت سيطرة مُحفز AOX1. كما تحتوي أيضًا على علامة c-Myc لتسهيل الكشف، وعلامة متعددة الهيستيدين (6xHis) لتسهيل الكشف عن البروتين وتنقيته. ونظرًا لأن فطر البيشيا باستيا يُفرز عددًا قليلًا من البروتينات بشكل طبيعي، يُمكن استخدام تسلسل الإشارة خارج الخلوية في ناقل pPICZα لتحفيز إفراز البروتين في وسط الاستنبات، مما يُسهل عملية التنقية اللاحقة. احصل على تكامل عالي العدد من النسخ باستخدام مضاد زيوسين™ الحيوي. تستخدم مجموعة EasySelect™ للتعبير الجيني في نبات البيشيا مضاد زيوسين™ الحيوي لاختيار خلايا البيشيا المحولة. تحتوي ناقلات pPICZ وpPICZα على جين البليوميسين من بكتيريا Streptoallotichus hindustanus (Sh ble) الذي يمنح مقاومة لمضاد زيوسين™ الحيوي. يمكن دمج ناقلات pPICZ وpPICZα بشكل مستقر في جينوم البيشيا. من خلال زيادة تركيز مضاد زيوسين™ الحيوي، يمكنك بسهولة اختيار المستنسخات ذات أعلى عدد من العناصر المتكاملة وأعلى مستويات التعبير البروتيني. تحتوي مجموعة EasySelect™ للتعبير الجيني في نبات البيشيا على المكونات التالية: قوارير طعن من سلالات Pichia pastoris وE. coli لبدء مزارعك. محاليل لإنتاج خلايا بيشيا قادرة على التحول. ناقلات pPICZ وpPICZα لدمج جينك مع محفز AOX1. بادئات التسلسل لتأكيد إدخال جينك في نواقل pPICZ. مضاد حيوي زيوسين™ لاختيار خلايا بيكيا المحولة. المراجع: 1. سيريجينو، جيه إل، وكريج، جيه إم. التعبير عن البروتين غير المتجانس في خميرة بيكيا باستوريس الميثيلية. مجلة FEMS لعلم الأحياء الدقيقة. يناير 2000؛ 24(1): 45-66. [PubMed] 2. سيريجينو، جي بي، وسيريجينو، جيه إل، وإيلجن، سي، وكريج، جيه إم. إنتاج البروتينات المؤتلفة في مزارع التخمير لخميرة بيكيا باستوريس. الرأي الحالي في التكنولوجيا الحيوية. أغسطس 2002؛ 13(4): 329-332. [PubMed] 3. كريج، جيه إم. مقدمة: الفروق بين بيكيا باستوريس وأنظمة التعبير الأخرى. طرق البيولوجيا الجزيئية. 2007؛ 389: 1-10. [PubMed] 4. كريج جيه ​​إم، تولستوروكوف آي، كوساري إيه، سونغا جيه، مادن كيه، تشابيل تي. التعبير في خميرة بيكيا باستوريس. طرق علم الإنزيمات. 2009؛463:169-89. [PubMed]5. كريج جيه ​​إم، مادن كيه آر، بارينجر كيه جيه، ثيل جي بي، ستيلمان سي إيه. التوصيف الوظيفي لجيني أوكسيداز الكحول من خميرة بيكيا باستوريس. بيولوجيا الخلية الجزيئية. مارس 1989؛9(3):1316-23. [PubMed] بكتيريا مقاومة للمضادات الحيوية: زيوسين™ (ZeoR)
سلالة بكتيرية أو خميرة: GS115، KM71H، X-33
طريقة الاستنساخ: إنزيم التقييد / MCS
آلية التعبير: التعبير الخلوي
نظام التعبير: الخميرة
للاستخدام مع (التطبيق): التعبير عن البروتين
خط الإنتاج: EasySelect™
نوع المنتج: مجموعة أدوات التعبير
علامة البروتين: علامة الهيستيدين (6X)، علامة إبيتوب c-Myc
الكمية: طقم واحد
عامل الانتقاء (حقيقيات النوى): زيوسين
نوع الخلية: خلايا الخميرة
التنسيق: مجموعة
الجهة المنظمة: AOX1
النوع: P. pastoris
المتجه: pPIC
حجم الوحدة: كل وحدة