Thermo Fisher، L150001، مجموعة GeneRacer™ مع AMV RT ومجموعة TOPO TA Cloning™ للتسلسل

مجموعة GeneRacer™ مع AMV RT ومجموعة TOPO TA Cloning™ للتسلسل. GeneRacer™ هي تقنية RACE (التضخيم السريع لنهايات cDNA) متطورة تُحسّن كفاءة تضخيم نهايات cDNA كاملة الطول 5' و3'. باستخدام مجموعة GeneRacer™، يمكنك:
• توليد الحمض النووي التكميلي (cDNA) من نسخ يصل طولها إلى 10 كيلوبايت
• الحصول على الطرف 5' كامل الطول للنسخ النادرة التي يقل عدد نسخها عن 30 نسخة لكل خلية
• استنساخ نهايتي 5' و3' كاملتين لبناء تسلسل cDNA كامل. تتوفر مجموعة GeneRacer™ مع إنزيم النسخ العكسي SuperScript™ III (RT) لتحسين تضخيم نهاية 5' كاملة الطول من mRNA الطويل والمعقد. تم تعديل جزء RNase H من SuperScript™ III RT لتجنب قطع mRNA أثناء تخليق cDNA، مما يزيد من حجم وكمية cDNA الناتج. يتميز SuperScript™ III RT بثبات حراري أعلى من إنزيمات النسخ العكسي التقليدية، مما يُمكّن من النسخ العكسي في درجات حرارة أعلى، ويُخفف من البنية الثانوية للقوالب المعقدة، ويسمح باكتمال تخليق cDNA. آلية عمل GeneRacer™: تضمن مجموعة GeneRacer™ تضخيم النسخ التي تحتوي فقط على نهايات cDNA كاملة الطول (1،2). يوضح الشكل 1 آلية عمل مجموعة GeneRacer™. يبدأ البروتوكول المتقدم على مستوى RNA باستهداف mRNA ذي غطاء 5' فقط. في الخطوات اللاحقة، تُزال القبعة ويُستبدل بها تسلسل GeneRacer™ RNA Oligo. أثناء النسخ العكسي، يُدمج تسلسل GeneRacer™ RNA Oligo في الحمض النووي المكمل (cDNA). يحتوي الحمض النووي المكمل (cDNA) الذي نُسخ عكسيًا بالكامل فقط على هذا التسلسل المعروف. ثم يُجرى تفاعل البوليميراز المتسلسل 5´ RACE باستخدام بادئ GeneRacer™ 5´ الخاص بتسلسل GeneRacer™ RNA Oligo وبادئ خاص بالجين. والنتيجة هي حمض نووي مُضخّم يحتوي على تسلسل الحمض النووي المكمل (cDNA) كامل الطول 5´. الحساسية والطول: لإثبات قدرة مجموعة GeneRacer™ على التقاط نهاية 5´ كاملة الطول من الحمض النووي المكمل (cDNA)، تم تضخيم نهايات 5´ للجينات ذات مواقع بدء النسخ المعروفة. بدءًا من الحمض النووي الريبوزي الكلي (RNA) واتباعًا لبروتوكول GeneRacer™، تم تضخيم كل من النسخ الطويلة (10 كيلوبايت) والرسائل النادرة الموجودة بنسبة 0.01%، أو 30 نسخة لكل خلية (الشكل 2). سلالة بكتيرية أو خميرة: TOP10
طريقة الاستنساخ: TOPO TA
للاستخدام مع (التطبيق): النسخ العكسي
المحتويات: تحتوي كل مجموعة GeneRacer على صندوق GeneRacer، وصندوق RT، وأعمدة SNAP، ومجموعة TOPO Cloning. يحتوي كل من صندوق GeneRacer وصندوق RT على كمية كافية من الكواشف لخمسة تفاعلات cDNA بالإضافة إلى تفاعل تحكم واحد وبادئات لـ 50 تفاعل PCR. يحتوي صندوق GeneRacer على الإنزيمات CIP وTAP وT4 RNA ligase ومحاليلها المنظمة، وGeneRacer RNA Oligo (مُقسّم مسبقًا ومُجفّف بالتجميد)، وبادئات GeneRacer وبادئات Nested، ومثبط الريبونوكلياز المؤتلف RNaseOUT، والفينول/الكلوروفورم، وجليكوجين بلح البحر، والماء المعقم، وعناصر التحكم. يُحفظ في درجة حرارة -20 درجة مئوية. يحتوي صندوق SuperScript III RT على SuperScript III RT، ومحلول منظم 5X للسلسلة الأولى، وDTT، وRNase H، وبادئات عشوائية، وبادئ GeneRacer Oligo dT، ومزيج dNTP. يُحفظ في درجة حرارة -20 درجة مئوية. يحتوي صندوق AMV RT المستنسخ على AMV RT المستنسخ، ومحلول RT 5X، وبادئات عشوائية، وبادئ GeneRacer Oligo dT، ومزيج dNTP.
خط الإنتاج: GeneRacer™، TA Cloning™، TOPO™
نوع المنتج: طقم استنساخ
الكمية: طقم واحد
المتجه: pCR4-TOPO TA
التنسيق: مجموعة
حجم الوحدة: كل وحدة