Desde la clonación rutinaria hasta la cuantificación de alto riesgo, la cartera de PCR de Thermo Fisher incluye instrumentos, mezclas maestras, enzimas, sondas, plásticos y kits listos para usar, para que pueda crear flujos de trabajo de ADN/ARN fiables de principio a fin. Como distribuidor autorizado, Iright ofrece una amplia gama de opciones de Thermo Fisher, asesoramiento técnico y disponibilidad constante para ayudarle a encontrar los productos que mejor se adapten a su ensayo y rendimiento.

Instrumentos de PCR y sistemas de qPCR en tiempo real (familia QuantStudio)

Elija entre termocicladores convencionales para PCR de punto final y sistemas de qPCR en tiempo real cuando necesite cuantificación, curvas de fusión o genotipado. Las plataformas QuantStudio™ abarcan desde unidades compactas de 96 pocillos hasta sistemas de 384 pocillos listos para la automatización, con múltiples canales ópticos y un software intuitivo para una configuración, captura de datos y generación de informes consistentes en todos los laboratorios.

Para las comprobaciones de clonación y los análisis de rutina, utilice un termociclador de ciclo rápido con calentamiento uniforme y rampas de velocidad precisas. Para la cuantificación (expresión génica, carga viral, CNV), seleccione un sistema QuantStudio en tiempo real compatible con placas de 96/384 pocillos, canales multiplex y colorantes de referencia. Si sus dianas tienen una abundancia excepcionalmente baja o están inhibidas, considere la PCR digital para particionar las reacciones y obtener una cuantificación absoluta sin curvas estándar.

Mezclas maestras de PCR y enzimas de alta fidelidad (TaqMan, SYBR)

La química de reacción determina la sensibilidad, la especificidad y la velocidad. Las mezclas maestras Thermo Fisher están formuladas para qPCR con sonda o colorante, ciclado rápido, resistencia a inhibidores y configuración a temperatura ambiente. Las polimerasas de alta fidelidad proporcionan una precisión superior para la clonación, la mutagénesis y la secuenciación de amplicones.

Utilice las mezclas maestras TaqMan™ cuando necesite alta especificidad, multiplexación limpia e interpretación sencilla. Elija las mezclas SYBR™ Green si desea una cuantificación rentable con verificación de la identidad del amplicón mediante curva de fusión. Para PCR de punto final, donde la tasa de error es importante, elija una ADN polimerasa de alta fidelidad y corrección de errores para minimizar las sustituciones e indeles no deseadas.

TaqMan vs. SYBR de un vistazo

Kits de transcripción inversa y RT-qPCR de un solo paso (serie TaqPath)

Los ensayos de ARN introducen una capa adicional de variabilidad; un flujo de trabajo de RT adecuado reduce el tiempo de manipulación y mejora la consistencia. Thermo Fisher ofrece transcriptasas inversas independientes para RT→qPCR de dos pasos y mezclas integradas TaqPath™ de RT-qPCR de un solo paso que combinan la transcripción inversa y la amplificación en un solo tubo para mayor velocidad y menos transferencias.

Elija la RT-qPCR de dos pasos si desea archivar ADNc, analizar múltiples dianas de la misma transcripción inversa u optimizar la RT y la qPCR por separado. Elija la RT-qPCR de un solo paso para una detección optimizada de patógenos o un cribado de alto rendimiento, donde la menor manipulación reduce el riesgo de contaminación y acelera la obtención de resultados.

Sondas TaqMan, colorantes SYBR y estándares de referencia para qPCR

Además de las enzimas y los tampones, los componentes a nivel de ensayo estabilizan el rendimiento. Las sondas de hidrólisis (TaqMan) con supresores no fluorescentes ofrecen una robusta relación señal-ruido y multiplexación, mientras que los colorantes intercalantes proporcionan una fluorescencia rentable para dianas de plexo simple y laboratorios de enseñanza. Los controles adecuados (NTC, estándares positivos y controles de extracción) convierten la fluorescencia bruta en decisiones defendibles.

Incluya un control sin plantilla para detectar contaminación y un control positivo o una curva estándar para confirmar la química y el rango dinámico. Para garantizar la consistencia entre las ejecuciones, utilice colorantes de referencia y calibre los canales ópticos según el manual del instrumento. Al solucionar problemas, confirme la identidad del amplicón mediante la curva de fusión (SYBR) o el gel, y revise el diseño del cebador/sonda para detectar dímeros o SNP.

Plásticos de grado PCR: placas ópticas MicroAmp, películas adhesivas, tubos y tiras de 8

La transferencia térmica y la claridad óptica dependen del plástico elegido. Las placas y películas ópticas MicroAmp™ mantienen la planitud, la integridad del sellado y una alta transmitancia, de modo que las líneas base de qPCR y los valores de Ct se mantienen estables entre placas. Los tubos de baja unión, libres de ARNasa/DNasa, y los formatos de 8 tiras reducen las pérdidas por adsorción y mejoran la reproducibilidad en volúmenes pequeños.

Seleccione placas ópticas de 96 pocillos para un rendimiento rutinario y placas de 384 pocillos cuando necesite más muestras por análisis con menos reactivo por reacción. Adapte la altura y el estilo del faldón de la placa al bloque de su instrumento y combínelos con películas adhesivas ópticas o sellos térmicos aptos para qPCR. Para PCR de punto final, los tubos de 0,2 mL o los tubos de 8 tiras con tapas abovedadas mejoran la gestión de la condensación y la uniformidad térmica.

Kits de aplicación para la detección de patógenos, genotipificación y expresión génica

Los kits específicos para cada ensayo combinan enzimas, tampones, controles y protocolos compatibles para que alcance un rendimiento validado más rápidamente. Para la detección de patógenos, los kits de RT-qPCR de un solo paso optimizan las pruebas de ARN viral o ADN bacteriano con dianas definidas, controles y opciones de ciclado rápido. En los flujos de trabajo de genotipado, los ensayos basados ​​en sondas resuelven SNP y pequeñas variantes con gráficos de discriminación alélica claros.

Para la expresión génica, combine la transcripción inversa fiable con mezclas de qPCR optimizadas para transcripciones con bajo número de copias y genes de referencia. Al ampliar la escala, los formatos en placa, los controles premezclados y las químicas fáciles de automatizar reducen la variabilidad de la configuración y simplifican la estandarización entre sitios. Documente los números de lote y almacene los componentes del kit a las temperaturas recomendadas para proteger la sensibilidad.

Cómo elegir: Adapte el instrumento, la química y el formato de placa a su ensayo

Esta matriz rápida alinea los objetivos de la aplicación con la capacidad del instrumento, la química y los plásticos. Úsela para limitar las opciones y luego confirmar la compatibilidad con el manual del instrumento y las especificaciones de los reactivos. Si su flujo de trabajo abarca varias modalidades, priorice el paso más sensible y adapte sus requisitos.

Tras identificar la fila adecuada para su ensayo, seleccione las mezclas maestras compatibles con la química de la sonda o el colorante, confirme la altura de la placa con respecto a su bloque y elija sellos aptos para la óptica de qPCR. Si realiza multiplexación, evalúe las combinaciones de fluoróforo/extintor y la compatibilidad espectral con los canales de su instrumento.

Preguntas frecuentes: Flujos de trabajo de PCR y qPCR de Thermo Fisher

Las respuestas claras reducen el tiempo de configuración y ayudan a estandarizar las compras. Los siguientes puntos abordan las preguntas que la mayoría de los equipos encuentran al pasar de pruebas piloto a rutinas o al escalar entre ubicaciones con métodos e informes compartidos.

P1. ¿Cuándo debería elegir las sondas TaqMan™ en lugar de SYBR™ Green?
Utilice TaqMan cuando la especificidad y la multiplexación sean prioritarias, como en la genotipificación o en paneles de patógenos. Utilice SYBR para ensayos de plexo simple rentables donde una curva de fusión confirma la identidad del amplicón. Para muestras dudosas, los ensayos basados ​​en sondas suelen proporcionar umbrales más precisos.

P2. ¿Qué sucede si mi placa y sello de qPCR no son compatibles con el instrumento?
Una altura de placa desigual o una óptica de baja calidad pueden desplazar las líneas base, aplanar las curvas de amplificación y causar efectos de borde. Asegúrese de que el tipo de placa y los sellos coincidan con la guía del instrumento y verifique que la presión de sellado sea uniforme en toda la placa para evitar la evaporación.

P3. ¿Cómo puedo abordar objetivos con niveles muy bajos de abundancia o matrices ricas en inhibidores?
Concentre y purifique los ácidos nucleicos, luego utilice mezclas tolerantes a inhibidores o pase a PCR digital. El particionamiento aumenta la concentración efectiva por reacción y evita la necesidad de curvas estándar, lo que mejora la detección en muestras complejas.

P4. ¿Debería utilizar RT-qPCR de un solo paso o de dos pasos para el ARN?
El método de un solo paso es más rápido y reduce la manipulación, ideal para la detección o el cribado de patógenos. El método de dos pasos es más flexible cuando se necesita archivar ADNc o sondear múltiples dianas de la misma transcripción inversa. Elija según el rendimiento y la amplitud del ensayo.

P5. ¿Cómo puedo mejorar la reproducibilidad en distintos sitios?
Estandarice mezclas maestras, colorantes de referencia, tipos de placa y configuraciones de análisis. Comparta protocolos y plantillas de ciclado validados, bloquee la selección de fluoróforos y documente los números de lote. Incluya controles en cada análisis para supervisar la deriva y el rendimiento de los reactivos.

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Cuando esté listo para desarrollar o escalar su flujo de trabajo de PCR, Iright puede mapear la compatibilidad de los instrumentos, recomendar mezclas maestras y obtener placas y sellos MicroAmp compatibles con su bloque. Recibirá presupuestos rápidos, documentación de lotes y consejos prácticos que le ayudarán a avanzar en sus experimentos, desde la configuración hasta el resultado.

• Solicite una verificación de compatibilidad : modelo de instrumento → altura de la placa, tipo de sello, tinte de referencia.

• Solicite una lista personalizada : sistemas QuantStudio, mezclas TaqMan/SYBR y kits de un solo paso TaqPath.

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