Reactivos de análisis de proteínas Thermo Fisher para Western Blot, ELISA y proteómica

Desde la cuantificación precisa de proteínas hasta el Western Blot, la purificación por afinidad, la reticulación y la proteómica basada en MS, esta colección seleccionada le ofrece reactivos Thermo Fisher de alto rendimiento, de confianza para la biología de proteínas diaria. Explore por caso de uso, compare especificaciones y acceda directamente a kits y químicas validadas.

¿Qué hay en esta colección (por familia de productos)?

Esta colección está organizada para ayudarle a encontrar rápidamente el reactivo adecuado para su flujo de trabajo, manteniendo la transparencia de los SKU para la compra y el cumplimiento normativo. A continuación, se presentan las principales familias que encontrará y ejemplos representativos.

• Ensayos de cuantificación de proteínas : BCA (por ejemplo, Pierce™ BCA Protein Assay Kit, Cat. 23225 ), Micro BCA ( 23227 ), reactivo de ensayo de 660 nm ( 22660 ) ​​y kit completo ( 22662 ).

• Lisis celular e inhibidores : tampón de lisis RIPA ( 89900 ); cóctel inhibidor de proteasa Halt™ 100×, sin EDTA ( 87785 ) o con EDTA ( 87786 ); inhibidor combinado de proteasa/fosfatasa ( 78440 ).

• Reactivos de electroforesis y transferencia Western : sustrato SuperSignal™ West Pico PLUS ECL ( 34580 ); sustrato West Femto ( 34095 ); membranas de transferencia de PVDF en rollo de 0,45 µm ( 88518 ); membranas de nitrocelulosa de 0,45 µm ( 88018 ); PageRuler™ Plus Prestained Protein Ladder ( 26619 ).

• Herramientas de afinidad y limpieza : perlas magnéticas de proteína A/G ( 88802 ); Resina HisPur™ Ni-NTA ( 88221 ); Columnas de desalinización giratorias Zeba™ 7K MWCO ( 89882 , 89890 ).

• Conjugación y reticulación : EZ-Link™ Sulfo-NHS-Biotina ( 21217 ); EZ-Link™ NHS-PEG4-Biotina ( 21330 ); Reticulador BS3 ( 21580 , 21586 ).

• Preparación de muestras de proteómica : proteasa de tripsina Pierce™, grado MS ( 90057 ); etiquetas TMTpro™ de 16 plexos ( A44520 ) y 18 plexos ( A52045 ).

Compatibilidad y especificaciones (referencia rápida)

Elegir reactivos compatibles con la matriz de muestra y el método de detección ahorra tiempo en el proceso posterior. Utilice esta vista compacta para confirmar la compatibilidad antes de realizar el pedido y, a continuación, consulte las hojas de datos según sea necesario.

Aplicaciones y flujos de trabajo (cuatro tarjetas de inicio rápido)

Estos flujos sencillos y fiables le ayudan a reducir las variables y a mantener la coherencia de los datos en todos los experimentos. Siga los pasos e introduzca los SKU exactos indicados anteriormente según sea necesario.

A. Western blot: del lisado a la señal

1. Lise en RIPA ( 89900 ) + inhibidores de Halt ( 87785 ).

2. Cuantificar (BCA 23225 o 660 nm 22660 ).

3. Ejecutar SDS-PAGE; transferir a PVDF ( 88518 ) o nitrocelulosa ( 88018 ).

4. Detectar con West Pico PLUS ( 34580 ) o West Femto ( 34095 ).

B. IP/Co-IP: enriquece tu público objetivo

1. Lisado preaclarado; unirse a perlas magnéticas de proteína A/G ( 88802 ).

2. Lavar; eluir en tampón suave.

3. Analizar mediante SDS-PAGE y Western blot como se indica anteriormente.

C. Purificación y limpieza de la etiqueta His

1. Se une a la resina HisPur Ni-NTA ( 88221 ) en condiciones nativas o desnaturalizantes.

2. Eluir con imidazol; tampón de intercambio en columnas Zeba (0,5–2 mL: 89882 , 89890 ).

3. Cuantificar y proceder a los ensayos posteriores.

D. Proteómica: digestión y multiplexación

1. Reducir/alquilar; digerir con Pierce Trypsin MS-grade ( 90057 ).

2. Etiquete los péptidos con TMTpro 16-plex ( A44520 ) o 18-plex ( A52045 ).

3. Combinar, fraccionar y analizar por LC-MS/MS.

Consejos prácticos (para mejorar el éxito en el primer paso)

Antes de empezar, unos pequeños ajustes pueden mejorar considerablemente la reproducibilidad y la relación señal-ruido en los flujos de trabajo. Tenga a mano estas sugerencias al planificar y documentar sus ejecuciones.

• Adapte la química del ensayo a la matriz. Use 660 nm cuando sea inevitable el uso de detergentes iónicos o reductores fuertes; añada IDCR si es necesario para ampliar la tolerancia.

• Seleccione la membrana por tamaño. El PVDF o la nitrocelulosa de 0,45 µm son adecuados para la mayoría de las proteínas; considere 0,2 µm para objetivos de <20 kDa para reducir el paso.

• Elija el sustrato que mejor se adapte a la abundancia. West Pico PLUS para la expresión rutinaria; West Femto para objetivos muy bajos y así evitar la sobreexposición.

• Proteja las proteínas desde el principio. Añada inhibidores de Halt durante la lisis y mantenga las muestras frías para prevenir la proteólisis.

• Para purificaciones con etiqueta His, lavar con imidazol moderado (20–40 mM) para reducir la unión no específica antes de la elución.

• Utilice pasos de desalinización después del etiquetado, la reticulación o los cambios de tampón para mejorar el rendimiento del ensayo posterior.

• Documente el lote y el SKU en su ELN junto con los factores de dilución; esto acelera las auditorías y la transferencia de métodos.

Preguntas frecuentes

Respuestas sencillas a las preguntas que escuchamos con más frecuencia, con enlaces a documentación principal para una lectura más profunda.

P1: ¿Cuándo debo elegir el ensayo de 660 nm en lugar de BCA?
R: Si sus muestras contienen detergentes iónicos o altos niveles de reductor, el ensayo de 660 nm suele ser más tolerante (y puede combinarse con IDCR). Utilice BCA cuando la matriz sea más simple y desee un amplio rango dinámico con estándares compatibles.

P2: PVDF o nitrocelulosa: ¿qué es mejor para mi transferencia?
R: El PVDF ofrece mayor unión a proteínas y durabilidad para la reprobación; la nitrocelulosa es rápida y proporciona un fondo bajo. Ambos formatos de 0,45 µm son compatibles con la mayoría de las proteínas.

P3: ¿Con qué sustrato ECL debería empezar?
R: Comience con West Pico PLUS para objetivos típicos; pase a West Femto si la expresión es muy baja o si necesita la mayor sensibilidad sin extender los tiempos de exposición.

P4: ¿Puedo utilizar HisPur Ni-NTA en condiciones desnaturalizantes?
R: Sí. HisPur Ni-NTA es compatible con flujos de trabajo nativos o desnaturalizantes; solo asegúrese de que el imidazol y el pH estén optimizados.

P5: ¿Cuál es una preparación proteómica estándar desde células hasta LC-MS?
A: Lisar con inhibidores, reducir/alquilar, digerir con tripsina Pierce (grado MS), limpiar y multiplexar con etiquetas TMTpro antes de LC-MS/MS.

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¿Listo para configurar tu flujo de trabajo? Agrega los SKU anteriores a tu carrito o solicita una lista de materiales personalizada según tu aplicación (Western blot, IP, IMAC o proteómica). Si nos compartes tu tipo de muestra y sistema de detección, te recomendaremos un paquete que se ajuste a tu presupuesto y plazo.