Anticuerpos primarios Thermo Fisher: conjugados Alexa Fluor y HRP

Estás en el lugar indicado para encontrar anticuerpos primarios de Thermo Fisher Scientific (Invitrogen™) para Western blot, IHC, ICC/IF, citometría de flujo, ELISA y más. Esta colección seleccionada te ayuda a comparar rápidamente clones, formatos y casos de uso, y luego contacta con Iright para obtener presupuestos justos y asistencia para el almacenamiento a la medida de tu laboratorio.

¿Qué son los anticuerpos primarios?

Los anticuerpos primarios se unen directamente a un antígeno específico (epítopo proteico) y son la piedra angular de los procesos de inmunodetección y obtención de imágenes. Thermo Fisher ofrece anticuerpos monoclonales de ratón, conejo y rata; anticuerpos recombinantes de conejo y ratón; y policlonales selectos, lo que le ofrece opciones de especificidad, sensibilidad y compatibilidad con ensayos multiplexados.

Aplicaciones y casos de uso en WB, IHC, ICC/IF, Flow

Desde controles de carga en Western blots hasta marcadores neuronales en IHC, puede adaptar dianas y clones a su aplicación. Para WB, los controles de GAPDH y β-actina son estándares; para biología mitocondrial, TOMM20 y COX IV son populares; para inmunología y citometría de flujo, los clones CD3 cubren paneles humanos, murinos y aviares.

Escenarios comunes

• Western blot (WB) : cuantificar proteínas diana con GAPDH/β-actina como controles internos.
• IHC/IHC-P: Mapee la distribución de tejidos utilizando clones validados para COX IV o NeuN.
  
• ICC/IF: Visualizar la localización subcelular (por ejemplo, TOMM20 para mitocondrias).
  
• Citometría de flujo: Fenotipo de células T con conjugados CD3 (PE/APC/FITC).

Cómo elegir el anticuerpo primario adecuado

Comience con su aplicación y especie, luego elija un clon con rendimiento comprobado en ese método. Verifique la compatibilidad del hospedador/isotipo con los secundarios, confirme la reactividad de la especie y revise las diluciones recomendadas y los datos de verificación. Al multiplexar, mezcle hospedadores (p. ej., conejo + ratón) o utilice primarios directamente conjugados para simplificar la detección.

Lista de verificación rápida

• Aplicación y fijación (WB vs. IHC-P vs. ICC/IF vs. Flow)
• Reactividad de las especies y tejidos analizados
• Huésped/isotipo y disponibilidad secundaria
• Conjugado/formato (no conjugado, HRP, Alexa Fluor™, DyLight™)
• Cifras publicadas/validación basada en knockdown o knockout

Conjugados y formatos (Alexa Fluor™, HRP, DyLight™, sin conjugar)

Elegir la etiqueta correcta optimiza su flujo de trabajo. Los primarios HRP aceleran el WB sin un secundario; los conjugados Alexa Fluor o de tipo PE permiten IF/flujo en un solo paso; las variantes DyLight 680/800 admiten imágenes NIR y blots multiplex cuantitativos. La mayoría de los clones Thermo Fisher destacados están disponibles sin conjugar y en varios conjugados.

De un vistazo

• Sin conjugar: Máxima flexibilidad; emparejar con secundarios coincidentes con la especie.
• HRP: detección directa de WB quimioluminiscente (por ejemplo, β-actina MA5-15739-HRP; GAPDH MA5-31457).
  
• Fluoróforos: Alexa Fluor™, PE/APC (p. ej., CD3-PE MA5-28697; serie DYKDDDDK L5 Alexa).
  
• Infrarrojo cercano: opciones DyLight™ 680/800 para fondo bajo y amplio rango dinámico.

Notas de preparación y protocolo de muestra

La preparación de muestras sólidas mejora la relación señal-ruido y la reproducibilidad. Para WB, cargue una masa proteica consistente y verifique la transferencia; para IHC-P, optimice la recuperación de antígenos y bloquee la peroxidasa endógena si se utiliza HRP; para ICC/IF, equilibre la permeabilización con la preservación de epítopos; para flujo, titule los primarios e incluya colorantes de viabilidad.

Consejos prácticos

• WB: Utilice controles de mantenimiento (GAPDH, β-actina) en la misma membrana para normalizar.
• IHC-P: Comience con tampón de citrato pH 6,0 o Tris-EDTA pH 9,0; ajuste el tiempo de recuperación según el tejido.
• ICC/IF: Incluir detergente sólo según sea necesario; mantener los tampones isotónicos para preservar la morfología.
• Flujo: siga las dosis recomendadas de µg/prueba o µL/prueba y proteja los fluoróforos de la luz.

SKU destacados de Thermo Fisher / Invitrogen

A continuación se presentan muestras primarias representativas de Thermo Fisher (Invitrogen™) de alto uso, con números de catálogo verificados y detalles clave. Úselas como punto de partida para la validación y el diseño del panel; cada SKU tiene un enlace a una hoja de datos en el sitio web de Thermo Fisher (consulte las citas inmediatamente después de la tabla).

Pautas de almacenamiento y manipulación

Un almacenamiento adecuado protege la integridad del epítopo y prolonga su vida útil. Muchos anticuerpos Thermo Fisher se envían a 4 °C y se conservan a corto plazo a esa misma temperatura; para un almacenamiento prolongado, manténgalos a –20 °C y evite congelarlos y descongelarlos repetidamente. Las formulaciones con glicerol suelen ser aptas para congelación; los conjugados fotosensibles requieren almacenamiento en oscuridad. Consulte siempre la ficha técnica del producto.

Preguntas frecuentes: Anticuerpos primarios de Thermo Fisher

P1: ¿Cómo elijo entre monoclonal, policlonal y recombinante?
Elija monoclonales para el reconocimiento de epítopos específicos de clones y la consistencia de lote a lote, policlonales para robustez en epítopos difíciles y monoclonales recombinantes para alta reproducibilidad y rendimiento definido en todos los lotes.

P2: ¿Puedo utilizar primarios conjugados con HRP sin un secundario?
Sí, los primarios marcados con HRP (por ejemplo, β-actina MA5-15739-HRP; GAPDH MA5-31457) proporcionan detección directa en WB, lo que reduce los pasos y la variabilidad.

P3: ¿Qué pasa si mi objetivo es de baja abundancia o mitocondrial?
Utilice clones altamente validados con una fuerte relación señal-ruido (por ejemplo, TOMM20 3G5; clones COX IV K.473.4 o GT6310) y optimice la recuperación de antígeno para IHC-P.

P4: ¿Qué control de carga debo elegir: GAPDH o β-actina?
Seleccione según el tejido y el tratamiento. GAPDH y β-actina son ubicuos, pero su expresión puede variar; valide en su modelo y mantenga la exposición dentro del rango lineal. Los clones GA1R y BA3R destacados se utilizan ampliamente para WB e IF.

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