Western Blot de Thermo Fisher: membranas de PVDF/NC, escalas de proteínas y reactivos ECL

Como distribuidor de Thermo Fisher, Iright reúne todo lo necesario para realizar Western blots consistentes y listos para publicar: desde membranas y pilas de transferencia hasta sustratos ECL, escaleras, tampones y soluciones de decapado. Esta página le ayuda a comparar opciones rápidamente y a encontrar los SKU adecuados para su flujo de trabajo y presupuesto.

Cree un flujo de trabajo de Western Blot confiable

La calidad del Western blot se determina paso a paso: preparación limpia de la muestra, separación nítida, transferencia eficiente y detección precisa. A continuación, se presenta una vista práctica de cuatro etapas para que pueda diagnosticar problemas y elegir los consumibles adecuados sin conjeturas.

• Preparar → Separar (SDS-PAGE) : Confirmar la carga de proteínas y la compatibilidad del tampón; utilizar una escalera de amplio rango para el seguimiento de bandas.
• Transferencia a PVDF/NC : Seleccione el tamaño de poro en función del peso molecular de la proteína (0,2 µm para objetivos pequeños; 0,45 µm para peso molecular medio-alto); asegúrese de que haya contacto y enfriamiento consistentes.
• Bloquear → Sonda : Seleccione la química de bloqueo (BSA/caseína/comercial) alineada con la quimioluminiscencia HRP o la detección fluorescente; valide el huésped/objetivo para los primarios y los conjugados para los secundarios.
• Detectar → Cuantificar : elija la sensibilidad ECL (regular → femto) o la fluorescencia NIR; mantenga las exposiciones dentro del rango lineal; documente las configuraciones para la reproducibilidad.

Categorías principales de productos y cómo elegir

Cada categoría a continuación se relaciona con una decisión que se toma en el laboratorio: capacidad de enlace, control de fondo, sensibilidad y rendimiento. Utilice los criterios rápidos para limitar las opciones y luego vaya a los SKU destacados para los casos de uso más comunes.

• Membranas de Transferencia (PVDF y Nitrocelulosa) : El PVDF ofrece mayor unión a proteínas y robustez para el decapado/reprobado; la nitrocelulosa proporciona un fondo bajo y fácil manejo. Elija 0,2 µm para proteínas pequeñas y 0,45 µm para la mayoría de los objetivos. Entre las líneas representativas de Thermo Fisher se incluyen las Membranas de Transferencia de PVDF Pierce (p. ej., rollo de 0,45 µm, Cat. 88518 ; rollo de 0,2 µm, Cat. 88520 ) y las Membranas de Nitrocelulosa (p. ej., láminas de 0,2 µm, Cat. 88024 ; rollo de 0,45 µm, Cat. 88018 ).

• Escaleras/Marcadores de Proteínas : Utilice estándares preteñidos para monitorizar la transferencia y orientar las transferencias rápidamente. La escalera de proteínas preteñida PageRuler™ de 10–180 kDa es una opción ampliamente utilizada (Cat. 26616 , 26617 ).

• Pilas de transferencia y accesorios : para transferencias rápidas y sin complicaciones, las pilas de transferencia iBlot™ 2 preensambladas en nitrocelulosa (mini o regular) reducen el tiempo de configuración (Cat. IB23002 , IB23001 ).

• Tampones de bloqueo y lavado : Adapte la química de bloqueo al método de detección (caseína o BSA para HRP-ECL; bloqueadores de baja fluorescencia para NIR). Mantenga la concentración de TBST y los tiempos de lavado para controlar el fondo.

• Anticuerpos primarios y secundarios : verificar especie, clonalidad y conjugado (HRP/AP o fluoróforos); filtrar por “validado por WB” cuando esté disponible.

• Sustratos quimioluminiscentes (ECL) : seleccione la sensibilidad para adaptarse a la abundancia de proteínas: SuperSignal™ West Pico PLUS para transferencias de rutina (Cat. 34580 ) y SuperSignal™ West Femto para objetivos de baja abundancia (Cat. 34094 , 34096 ).

• Tampones de decapado : Para la reprobación, el tampón de decapado Western Blot Restore™ está disponible en varios tamaños de envase (Cat. 21062 , 21059 , 21063 ). Utilice decapados compatibles con fluorescencia para flujos de trabajo NIR.

Guía de selección rápida (tabla comparativa)

Utilice esta matriz de vista rápida para ajustar su objetivo y lectura a una membrana, nivel de ECL y conjunto de tampones. Está diseñada para un triaje rápido; siga los enlaces a las fichas de producto si necesita especificaciones o archivos SDS/IFU.

Productos destacados (los más vendidos validados)

A continuación, se muestran las selecciones de alta frecuencia en las que confían nuestros clientes. Los SKU y los nombres formales se ajustan a los listados de Thermo Fisher para que su laboratorio y su equipo de compras puedan realizar sus pedidos con confianza.

• Sustrato quimioluminiscente SuperSignal™ West Pico PLUS, 500 mL — Cat. 34580. Sustrato HRP balanceado para Western blots de rutina; se suministra como Luminol/Enhancer (250 mL) + Peróxido estable (250 mL). Ideal para objetivos de mantenimiento y de abundancia media.

• Sustrato de máxima sensibilidad SuperSignal™ West Femto — Cat. 34094 (las opciones varían según el tamaño del envase; también disponible como 34096 ). Para proteínas de baja abundancia, el rango lineal extendido ayuda a minimizar la saturación en la cuantificación.

• Escalera de proteínas preteñida PageRuler™, 10–180 kDa — Cat. 26616 (2 × 250 µL), 26617 (10 × 250 µL). Diez bandas de colores para una rápida evaluación del gel y la transferencia; listas para cargar, no requieren calentamiento ni reducción.

• Membranas de transferencia de PVDF Pierce™, 0,45 µm, rollo — Cat. 88518. Alta capacidad de unión y manejo duradero; una opción versátil para Western blot general y múltiples ciclos de sondeo.

• Membranas de transferencia de PVDF Pierce™, 0,2 µm, rollo — Cat. 88520. Optimizadas para proteínas/péptidos pequeños para reducir el paso de material durante la transferencia.

• Membranas de nitrocelulosa, 0,2 µm, láminas de 8 × 8 cm — Cat. 88024. Bajo fondo, láminas de tamaño práctico para minigeles; una opción fiable para la rutina.

• Membranas de nitrocelulosa, 0,45 µm, rollo de 3,5 m × 30 cm — Cat. 88018. Económicas para alto rendimiento; corte a medida para un almacenamiento uniforme en el laboratorio.

• Pilas de transferencia iBlot™ 2, nitrocelulosa (mini/regular) — Cat. IB23002 (mini), IB23001 (regular). Pilas preensambladas para transferencias rápidas con el dispositivo iBlot 2; excelentes para configuraciones estandarizadas y repetibles.

• Tampón de decapado Western Blot Restore™ — Cat. 21062 (30 mL), 21059 (500 mL), 21063 (5 L; también 21059X4 ). Decapado eficiente de PVDF y nitrocelulosa antes del reprobado.

Compatibilidad y consejos (reducir el fondo, mejorar la señal)

La mayoría de los problemas "misteriosos" se pueden prevenir con unas pocas comprobaciones constantes. Utilice las siguientes sugerencias para optimizar su flujo de trabajo sin cambiar los reactivos principales.

• Ajuste de detección de membrana : Combine PVDF con ECL de nivel femto cuando espere una abundancia baja; utilice 0,2 µm para proteínas pequeñas. La nitrocelulosa suele proporcionar un fondo más bajo para transferencias de rutina y ECL de nivel pico.

• Bloqueo y lavados : comience con caseína/BSA a la concentración recomendada por el fabricante, luego ajuste la sal TBST y el Tween al fondo. Un bloqueo excesivo o un detergente demasiado fuerte pueden suprimir la señal.

• Diluciones de anticuerpos : vuelva a optimizar las diluciones secundarias al pasar de sustratos Pico a Femto para evitar artefactos de sobreexposición; mantenga las exposiciones en el rango lineal para la densitometría.

• Consistencia de la transferencia : si las esquinas se desvanecen o las bandas se manchan, verifique el ensamblaje/la presión de la pila y equilibre los geles; las pilas preensambladas (iBlot 2) pueden reducir la variabilidad de la configuración.

• Estrategia de reprocesamiento : primero desprenda con cuidado; si cambia a fluorescencia, elija tampones de desprendimiento compatibles con fluorescencia para evitar el fondo.

Preguntas frecuentes

A continuación, encontrará respuestas concisas para ayudarle a elegir y evitar errores comunes. Cada respuesta incluye enlaces a categorías relevantes para obtener más detalles.

P1: ¿PVDF o nitrocelulosa para mi objetivo?
Para la mayoría de los objetivos de peso molecular medio-alto, tanto PVDF de 0,45 µm como NC de 0,45 µm son eficaces; el PVDF es más resistente para la reobservación y la ECL de alta sensibilidad, mientras que NC puede producir un fondo más bajo en las transferencias de rutina. Para proteínas pequeñas, elija membranas de 0,2 µm .

P2: ¿Cuándo necesito ECL de nivel femto?
Utilice SuperSignal West Femto cuando su objetivo sea escaso o cuando deba acortar los tiempos de exposición sin sacrificar la linealidad. Utilice West Pico PLUS para la validación y el mantenimiento habituales. Retitule los anticuerpos al cambiar la sensibilidad.

P3: ¿Puedo pelar y volver a pelar la misma membrana?
Sí— El tampón de decapado Restore está diseñado para PVDF y NC. Después del decapado, vuelva a bloquear y verifique el fondo antes de la siguiente sonda. Para la detección de fluorescencia posterior, utilice un decapador compatible con fluorescencia.

P4: ¿Las escaleras pre-teñidas afectan la detección Western?
No— PageRuler Prestained Ladder es compatible con SDS-PAGE y transferencia/detección Western y proporciona bandas visibles durante la transferencia y la obtención de imágenes.

Habla con Iright

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