BD, 554065, BD Pharmingen™ AKP Estreptavidina

Aplicación: ELISA (probado de forma rutinaria)
ID de registro: AB_10053566
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: La estreptavidina se conjugó con la enzima en condiciones óptimas. Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. Para un almacenamiento prolongado, se recomienda añadir un volumen igual de glicerol, alcanzando una concentración final del 50 % de glicerol y reduciéndola al 50 %.
Procedimientos de ensayo recomendados: Este conjugado de estreptavidina AKP se puede utilizar para marcar el anticuerpo de detección biotinilado en ELISA (con un sistema de sustrato adecuado). Se recomienda una dilución de 1:1000 (1:500 si se ha añadido glicerol). Para la tinción inmunohistoquímica, recomendamos el uso de estreptavidina AKP en nuestra formulación especial para inmunohistoquímica, BD Pharmingen™ AKP Streptavidin (n.º de cat. 551008). Protocolo general de ELISA tipo sándwich para placas ELISA de 96 pocillos Materiales necesarios: Solución de unión Salina tamponada con fosfato (PBS) pH 7,2. Tenga en cuenta que el pH del PBS se puede aumentar o disminuir, o se pueden utilizar otros tampones para obtener una mejor unión de un anticuerpo de captura según lo determinado experimentalmente. PBS/Tween® Agregue 0,5 ml de Tween®-20 en 1 L de PBS 1× para una solución de Tween®-20 al 0,05 %. Tampón de bloqueo: Prepare suero bovino fetal (FBS) al 10 % o BSA (grado de inmunoensayo) al 1 % en PBS. El tampón de bloqueo debe filtrarse para eliminar partículas antes de su uso. Tampón de bloqueo/Tween®: Prepare suero bovino fetal (FBS) al 10 %, suero de ternera recién nacida (NBCS) al 1 % o BSA (grado de inmunoensayo) al 1 % en PBS/Tween®. El tampón de bloqueo debe filtrarse para eliminar partículas antes de su uso. Sustratos cromogénicos Prepare soluciones de sustrato con el sustrato AKP disponible comercialmente, fosfato de nitrofenilo P (PNPP). El PNPP es un sustrato soluble en agua que produce un producto final de color amarillo (que absorbe la luz a 405 nm) al reaccionar con AKP. La intensidad del color es proporcional a la cantidad de anticuerpo o antígeno presente en la muestra de prueba, que se puede cuantificar utilizando un lector ELISA y un software ELISA. Anticuerpo de captura: 1. Diluya el anticuerpo de captura específico del analito purificado a ~1-4 μg/ml en solución de unión. Agregue 50 μl de anticuerpo diluido a los pocillos de una placa ELISA de unión a proteínas mejorada. 2. Selle la placa para evitar la evaporación. Incube durante la noche a 4 °C. Bloqueo: 3. Lleve la placa a TA, lave 3 veces con PBS/Tween® y bloquee la unión no específica agregando 200 μl de tampón de bloqueo por pocillo. 4. Selle la placa e incube a TA durante 1-2 h. 5. Lave ≥ 3 veces con PBS/Tween®. Estándares y muestras: 6. Añadir diluciones seriadas del analito estándar y las muestras de prueba diluidas en tampón de bloqueo/Tween® a 100 μl por pocillo. 7. Sellar la placa e incubarla durante 2-4 horas a temperatura ambiente o durante la noche a 4 °C. 8. Lavar ≥ 4 veces con PBS/Tween®. Anticuerpo de detección: 9. Diluir el anticuerpo de detección biotinilado específico del analito a 0,5-2 μg/ml en tampón de bloqueo/Tween®. Añadir 100 μl de anticuerpo diluido a cada pocillo. 10. Sellar la placa e incubarla durante 1 hora a temperatura ambiente. 11. Lavar ≥ 4 veces con PBS/Tween®. Fosfatasa alcalina de estreptavidina (AKP Streptavidina): 12. Diluir el conjugado de estreptavidina AKP (n.º de cat. 554065) hasta su concentración óptima pretitulada en tampón de bloqueo/Tween®. Añadir 100 μl por pocillo. 13. Sellar la placa e incubarla a temperatura ambiente durante 30 min. 14. Lavar ≥ 5 veces con PBS/Tween®. Sustrato cromogénico: 15. Añadir 100 μl de p-nitrofenilfosfato (1 mg/ml en K₂CO₃ 0,05 M, MgCl₂ 1 mM, pH 9,8) en cada pocillo. Incubar a temperatura ambiente (5-45 min) y controlar el desarrollo de color. 16. Tras el desarrollo de la reacción de color, medir la absorbancia del contenido del pocillo a 410 nm con un lector de microplacas ELISA. Los gráficos de absorbancia medidos a 410 nm frente a una serie de diluciones de concentraciones de analito estándar mediante software ELISA pueden emplearse para calcular los niveles de analito presentes en las muestras. Indicaciones de peligro: Puede provocar una reacción alérgica en la piel. Consejos de precaución: Usar guantes y protección ocular. Usar ropa protectora. Evitar respirar la niebla, los vapores o el aerosol. En caso de irritación o erupción cutánea: Consultar a un médico. EN CASO DE CONTACTO CON LA PIEL: Lavar con abundante agua. Eliminar el contenido/el recipiente de acuerdo con la normativa local, regional, nacional e internacional.
Avisos del producto: Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos. Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Consulte http://regdocs.bd.com para acceder a las fichas de datos de seguridad (FDS). Para conocer las patentes estadounidenses aplicables, consulte bd.com/patents.