BD, 550010, tampón de fijación ICC BD Pharmingen™

Preparación y almacenamiento: Preparación y almacenamiento Conservar sin diluir a 4°C.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Procedimiento para usar el tampón de fijación ICC de citocinas en inmunocitoquímica: 1. Coseche las células y lávelas dos veces en PBS mediante centrifugación (400 xg durante 5 min) para eliminar la proteína residual. 2. Ajuste la concentración celular a 4-5 x 10^6 células/ml en PBS. 3. Coloque 20 µl de la suspensión celular en cada pocillo de los portaobjetos de adhesión y deje que se adhieran a temperatura ambiente (TA) durante 20 min. Tenga en cuenta que los portaobjetos deben lavarse en PBS a TA durante 5 min antes de transferir las células. 4. Fije las células en los portaobjetos utilizando el tampón de fijación ICC (n.º de cat. 550010) durante 15 min a TA. 5. Lave los portaobjetos 2 veces en PBS con incubaciones de 5 min. 6. Bloquee los portaobjetos con PBS suplementado con 1% (p/v) BSA (Sigma) durante 30 min a TA o 10 min a 37 °C. 7. Lave los portaobjetos 2X en PBS y proceda con la tinción o séquelos al aire y guárdelos a -80 °C para uso futuro. 8. Incube los portaobjetos con 20 µl de suero de cabra al 1% y PBS con 0,1% (p/v) de saponina durante 30 min a TA. 9. Lave los portaobjetos 2X con PBS con incubaciones de 5 min. 10. Bloquee la actividad de peroxidasa endógena con tampón bloqueador de peroxidasa endógena (20 µl/pocillo) durante 10 min a TA. 11. Lave 2X en PBS con incubaciones de 5 min. 12. Incube cada pocillo con avidina (20 µl/pocillo) durante 15 min. 13. Lavar 2X en PBS con 5 min de incubación. 14. Incubar cada pocillo con biotina (20 µl/pocillo) durante 15 min. 15. Lavar 2X en PBS con 5 min de incubación. 16. Incubar cada pocillo durante 1 h a TA con 20 µl de anticuerpo específico de citocina purificado o control de isotipo de inmunoglobulina adecuado diluido en tampón diluyente de anticuerpos para IHC (n.º de cat. 559148). 17. Lavar los portaobjetos 2X en PBS con 5 min de incubación. 18. Incubar cada pocillo con 20 µl de un anticuerpo secundario biotinilado diluido en tampón diluyente (n.º de cat. 559148) durante 30 min a TA. 19. Lavar 2X en PBS con 5 min de incubación. 20. Aplicar 20 µl de estreptavidina-HRP (n.º de cat. 550946) a cada pocillo de los portaobjetos e incubar durante 30 min a temperatura ambiente. 21. Lavar los portaobjetos 2 veces con PBS con incubaciones de 5 minutos. 22. Incubar con tetraclorhidrato de 3-3'-diaminobencidina (DAB) (n.º de cat. 550880) durante menos de 5 min a temperatura ambiente. 23. Detener el desarrollo de la reacción de color lavando con PBS. 24. Los portaobjetos se montan posteriormente en un medio de montaje de almacenamiento a corto plazo. Centrifugaciones 1. Montar la cámara de muestra de la citocentrifugadora (p. ej., Cytospin 3, Shandon, Reino Unido o una centrífuga comparable), la tarjeta de filtro, los portaobjetos y los bastidores de citocentrifugación según las especificaciones del fabricante. 2. Cargar 40 µl de aproximadamente 1 x 10^6 células en cada cámara de muestra. 3. Centrifugue los portaobjetos a 600 rpm durante 2 min. 4. Retire los portaobjetos del soporte de citocentrifugación y colóquelos en un soporte de tinción. 5. Para la fijación y la tinción, siga los pasos del 4 al 24 especificados anteriormente para la tinción de células en portaobjetos de adhesión. Peligro: El tampón de fijación ICC contiene 2,09 % de formaldehído. Indicaciones de peligro Puede provocar una reacción alérgica en la piel. Se sospecha que provoca defectos genéticos. Puede causar cáncer. Vía de exposición: Inhalatorio. Consejos de precaución Use ropa protectora / protección ocular. Use guantes protectores. Evite respirar la niebla / los vapores / el aerosol. Si se produce irritación o sarpullido en la piel: Consulte a un médico. EN CASO DE CONTACTO CON LA PIEL: Lavar con abundante agua. Eliminar el contenido / el recipiente de acuerdo con las regulaciones locales / regionales / nacionales / internacionales.
Avisos del producto: Avisos del producto Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos.