BD, 551516, BD IMag™ Partículas anti-CD8a de ratón - DM

Nombre alternativo: Cd8a; cadena alfa CD8; Ly-2; Lyt2; Lyt-2; Ly-35; Ly-B
Isotipo: LOU de rata, también conocida como Louvain, LOU/C, LOU/M IgG2a, κ
Inmunógeno: células de bazo de ratón o membranas de timocitos
Aplicación: Separación de células (probada rutinariamente)
ID de registro: AB_398512
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo o la estreptavidina se conjugaron con las partículas magnéticas en condiciones óptimas y se eliminó el anticuerpo/estreptavidina no conjugado.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Los leucocitos se marcan con partículas CD8a antirratón BD IMag™ - DM según el protocolo de marcaje magnético. Esta suspensión celular marcada se coloca entonces dentro del campo magnético del imán de separación celular BD IMag™ (n.º de cat. 552311). Las células marcadas migran hacia el imán (fracción positiva), dejando las células no marcadas en suspensión para que puedan extraerse (fracción negativa). A continuación, se retira el tubo del campo magnético para la resuspensión de la fracción positiva. La separación se repite dos veces para aumentar la pureza de la fracción positiva. Los pasos de la separación magnética se diagraman en el diagrama de flujo de separación. Después de lavar la fracción positiva, el pequeño tamaño de las partículas magnéticas permite que la fracción positiva se evalúe más a fondo en aplicaciones posteriores, como la citometría de flujo. PROTOCOLO DE MARCAJE MAGNÉTICO 1. Prepare una suspensión de células individuales del tejido linfoide de interés según los procedimientos de laboratorio estándar. Elimine los grumos de células o residuos pasando la suspensión a través de un filtro de nailon de 70 µm. 2. Diluya el tampón BD IMag™ (10X) (n.° de cat. 552362) 1:10 con agua destilada estéril o prepare el tampón BD IMag™ 1X complementando la solución salina tamponada con fosfato con 0,5 % de BSA, 2 mM de EDTA y 0,09 % de azida sódica. Coloque en hielo. Aunque nuestra experiencia indica que el uso de anti-CD16/CD32 de rata purificado (Mouse BD Fc Block™) (n.° de cat. 553141/553142) no es necesario para una separación celular óptima, algunos laboratorios podrían considerarlo en sus estudios. Si añade el bloque Fc de BD de ratón, continúe con el paso 3. Si no lo añade, continúe con el paso 4. 3. Añada el bloque Fc de BD de ratón a una concentración de 0,25 µg/10^6 células e incube en hielo durante 15 minutos. 4. Lave las células con al menos un volumen igual de tampón BD IMag 1X y aspire cuidadosamente todo el sobrenadante. 5. Agite bien las partículas BD™ IMag anti-CD8a de ratón - DM y añada 50 µl de partículas por cada 10^7 células totales. 6. Mezcle bien. Refrigere a 6 °C - 12 °C durante 30 minutos. 7. Aumente el volumen de marcado de partículas BD IMag a 1-8 × 10^7 células/ml con tampón BD IMag™ 1X y coloque inmediatamente el tubo en el imán de separación celular BD IMag™. Incube a temperatura ambiente de 6 a 8 minutos. 8. Con el tubo en el imán de separación celular BD IMag™, aspire con cuidado el sobrenadante. Este sobrenadante contiene la fracción negativa. 9. Retire el tubo del imán de separación celular BD IMag™ y añada tampón BD IMag 1X hasta alcanzar el mismo volumen que en el paso 7. Resuspenda las células con cuidado pipeteando brevemente y vuelva a colocar el tubo en el imán de separación celular BD IMag™ durante otros 2-4 minutos. 10. Con el tubo en el imán de separación celular BD IMag™, aspire con cuidado el sobrenadante y deséchelo. 11. Repita los pasos 9 y 10. 12. Tras el último lavado, resuspenda la fracción positiva en un tampón adecuado y a la concentración adecuada para su posterior análisis. NOTA: Evite el etiquetado inespecífico trabajando con rapidez y respetando los tiempos de incubación recomendados.
Avisos del producto: Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Las partículas BD IMag™ se preparan a partir de partículas magnéticas carboxifuncionalizadas, fabricadas por Skold Technology y con licencia de patente estadounidense número 7,169,618. Consulte http://regdocs.bd.com para acceder a las fichas de datos de seguridad (FDS). Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos.