BD, 554657, tampón de tinción BD Pharmingen™ (BSA)

Preparación y almacenamiento: Preparación y almacenamiento Conservar sin diluir a 4°C.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Procedimiento para usar tampón de tinción de Pharmingen (BSA) para la tinción inmunofluorescente directa de células. 1. Prepare suspensiones de células individuales de tejido linfoide, médula ósea, sangre periférica o cultivos celulares utilizando protocolos estándar. 2. Lave las células dos veces en tampón de tinción de Pharmingen (BSA) frío y sedimente las células por centrifugación (p. ej., 300 x g a 4 °C). Resuspenda el sedimento celular con tampón de tinción de Pharmingen (BSA) frío hasta una concentración final de 2 x 10e7 células/ml. 3. Distribuya alícuotas de 50 µl de la suspensión celular (10e6 células) en tubos o en los pocillos de fondo redondo de las microplacas. 4. Diluya los anticuerpos fluorescentes a sus concentraciones óptimas predeterminadas en tampón de tinción de Pharmingen (BSA) y añada pequeñas alícuotas (p. ej., 10 µl) de los anticuerpos diluidos a los tubos o micropocillos que contienen las suspensiones de células diana. Incube durante 20 minutos en hielo protegido de la luz. El tiempo de tinción puede aumentarse (≥ 45 min) dependiendo de la avidez del anticuerpo fluorescente. 5. Lave las células dos veces con volúmenes de 200 µl (para placas de micropocillos) o 1 ml (para tubos) de tampón de tinción de Pharmingen (BSA) para eliminar los anticuerpos no unidos. Centrifugue las células a 300 xg durante 5 min. Después de cada centrifugación, aspire cuidadosamente (para placas de micropocillos o tubos) o invierta y seque (para tubos) los sobrenadantes de los pellets celulares. 6. Resuspenda el pellet celular en volúmenes de 200 µl (para placas de micropocillos) o 0,5 ml (para tubos) de tampón de tinción Pharmingen (BSA). Transfiera las células teñidas de las placas de micropocillos a los tubos apropiados para el análisis de citometría de flujo (ajuste el volumen final a ~0,5 ml). 7. Analice las muestras de células teñidas mediante citometría de flujo o microscopía de fluorescencia lo antes posible (p. ej., ≤ 4 horas) después de la tinción. Si debe retrasarse el análisis, las células teñidas pueden fijarse con paraformaldehído tamponado (p. ej., tampón Cytofix; n.º de cat. 554657) y almacenarse a 4 °C (protegidas de la luz). Las células fijadas deben analizarse lo antes posible (p. ej., hasta una semana después de la tinción y la fijación). Nota 1: El tampón de tinción Pharmingen (BSA) puede usarse de manera similar para la tinción inmunofluorescente indirecta de células. En este caso, repita los pasos 4 y 5 al utilizar anticuerpos primarios sin marcar o biotinilados. Nota 2: El tampón de tinción de Pharmingen (BSA) también puede utilizarse para la tinción inmunofluorescente de antígenos de superficie expresados ​​por células destinadas a ser fijadas y teñidas inmunofluorescentemente para antígenos intracelulares como las citocinas (para más detalles, consulte la referencia n.° 6 o los protocolos en línea en nuestro sitio web: www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/). Las células teñidas para citocinas intracelulares pueden resuspenderse y mantenerse (es decir, a 4 °C, protegidas de la luz) en tampón de tinción de Pharmingen (BSA) antes del análisis mediante citometría de flujo o microscopía de fluorescencia.
Avisos del producto: Consulte los protocolos técnicos en www.bdbiosciences.com/us/s/resources. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos.