BD, 554723, Tampón de permanente/lavado BD Perm/Wash™

Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C. Nota: El tampón de permanente/lavado BD contiene 100 ml de solución madre concentrada (10X) que contiene suero fetal bovino (SFB) y saponina. Es frecuente que el color de este producto varíe entre lotes. También es común la formación de una pequeña cantidad de precipitado insoluble. La variación de color y/o la formación de precipitado no afectan el rendimiento del producto. Si se desea, se puede eliminar el precipitado antes de usar pasando el tampón de permanente/lavado BD diluido 1X a través de un filtro de 0,45 micras.
Procedimientos de ensayo recomendados: Estimulación celular: Se han descrito diversos métodos in vitro para estimular la producción celular de citocinas. Los activadores policlonales han sido especialmente útiles para inducir la producción celular de citocinas. Entre estos activadores se incluyen: concanavalina A, lipopolisacárido, ésteres de forbol más ionóforo de calcio o ionomicina, fitohemaglutinina, enterotoxina B de estafilococo y anticuerpos monoclonales dirigidos contra subunidades del complejo TCR/CD3 (con o sin anticuerpos dirigidos contra receptores coestimuladores, como el CD28). Procedimiento para usar el tampón BD Perm/Wash™: 1. Fije las células usando un tampón que contenga paraformaldehído o use la solución BD Cytofix/Cytoperm™ (n.º de cat. 554722). 2. Permeabilice las células fijadas lavando 2 veces en tampón BD Perm/Wash 1X (n.º de cat. 554723) (p. ej., 1 ml/lavado para tinción en tubos y 250 µl/volumen final de lavado para tinción en microplacas). Incube durante 15 minutos en tampón BD Perm/Wash 1X (la incubación de 15 minutos se puede omitir si se usa BD Cytofix/Cytoperm para fijar las células). Sedimente las células. a. Diluya tampón BD Perm/Wash 10X en H₂O destilada para preparar una solución 1X antes de usar. 3. Tinción para citocinas intracelulares a. Resuspenda completamente las células fijadas/permeabilizadas en 50 µl de tampón de lavado BD Perm con una concentración óptima predeterminada de un anticuerpo anticitocina conjugado con fluorocromo o un control negativo adecuado. Incube a 4 °C durante 30 minutos en oscuridad. b. Lave las células dos veces con tampón de lavado BD Perm 1X (1 ml/lavado para la tinción en tubos y 250 µl/volumen final de lavado para la tinción en microplacas) y resuspéndalas en el tampón de tinción antes del análisis por citometría de flujo. Nota: Tanto el tampón BD Perm/Wash (n.° de cat. 554723) como la solución BD Cytofix/Cytoperm (n.° de cat. 554722) están incluidos en el kit BD Cytofix/Cytoperm (n.° de cat. 554714), así como en el kit BD Cytofix/Cytoperm Plus con el inhibidor del transporte de proteínas BD GolgiStop™ (con monensina; n.° de cat. 554715) y el kit BD Cytofix/Cytoperm Plus™ con el inhibidor del transporte de proteínas BD GolgiPlug™ (con brefeldina A; n.° de cat. 555028). Advertencia: La solución BD Perm/Wash contiene saponina y azida sódica, sustancias tóxicas conocidas. Evitar el contacto con la piel, los ojos y las mucosas.
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos.