BD, 558005, BD IMag™ Partículas magnéticas anti-CD25 humanas - DM

Nombre alternativo: IL-2R; IL2RA; IL-2Rα; TCGFR; antígeno TAC; p55
Reactividad: Humana (Pruebas de control de calidad)
Isotipo: Ratón BALB/c IgG1, κ
Inmunógeno: Células T activadas por fitohemaglutinina humana
Aplicación: Separación de células (probada rutinariamente)
Número de taller: III A769,T153; IV A8
ID de registro: AB_398646
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo o la estreptavidina se conjugaron con las partículas magnéticas en condiciones óptimas y se eliminó el anticuerpo/estreptavidina no conjugado.
Procedimientos de ensayo recomendados: Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se marcan con partículas magnéticas BD IMag™ anti-CD25 humana - DM de acuerdo con el protocolo de marcaje y separación magnética. Esta suspensión celular marcada se coloca entonces dentro del campo magnético del imán de separación celular BD IMag™. Las células marcadas migran hacia el imán (fracción positiva), dejando las células no marcadas en suspensión para que puedan extraerse (fracción negativa). Luego, el tubo se retira del campo magnético para la resuspensión de la fracción positiva. La separación se repite dos veces para aumentar la pureza de la fracción positiva. Los pasos de la separación magnética se diagraman en el diagrama de flujo de separación. Después de lavar la fracción positiva, puede evaluarse más a fondo en aplicaciones posteriores. El pequeño tamaño de las partículas BD IMag™ permite que la fracción positiva se evalúe más a fondo en aplicaciones posteriores, como por citometría de flujo. PROTOCOLO DE SEPARACIÓN Y ETIQUETADO MAGNÉTICO 1. Diluya el tampón BD IMag™ (10X) (n.° de cat. 552362) 1:10 con agua destilada estéril o prepare tampón BD IMag™ 1X complementando solución salina tamponada con fosfato con BSA al 0,5 %, EDTA 2 mM y azida sódica al 0,09 %. Consérvese a 4 °C. 2. Prepare PBMC a partir de sangre humana anticoagulada, preferiblemente mediante centrifugación en gradiente de densidad con Ficoll-Paque™. Opcional: Si se desean células Treg, enriquezca los linfocitos T CD4 con el kit de enriquecimiento de linfocitos T CD4 humanos BD IMag™ - DM (n.° de cat. 557939). 3. Cuente las células, lávelas con un exceso de volumen de tampón BD IMag™ 1X y aspire cuidadosamente todo el sobrenadante. 4. Agite bien las Partículas Magnéticas BD IMag™ Anti-Human CD25 - DM y añada 50 µl de partículas por cada 10^7 células totales. 5. MEZCLE COMPLETAMENTE. Incube a temperatura ambiente durante 30 minutos.† 6. Aumente el volumen de marcado de las partículas BD IMag™ a 1-8 x 10^7 células/ml con tampón BD IMag™ 1X y coloque inmediatamente el tubo en el Imán de Separación Celular. Incube de 8 a 10 minutos. 7. Con el tubo en el Imán de Separación Celular, aspire cuidadosamente el sobrenadante. Este sobrenadante contiene la fracción negativa. 8. Retire el tubo del imán de separación celular y agregue tampón BD IMag™ 1X al mismo volumen que en el paso 6. Resuspenda suavemente las células pipeteando hacia arriba y hacia abajo y regrese el tubo al imán de separación celular durante otros 2 a 4 minutos. 9. Con el tubo en el imán de separación celular, aspire cuidadosamente el sobrenadante y deséchelo. 10. Repita los pasos 8 y 9. 11. Después del paso de lavado final, resuspenda la fracción positiva en un tampón o medio apropiado y proceda con la(s) aplicación(es) posterior(es) deseada(s). NOTAS: * Consejos para una preparación celular exitosa: - Extraiga la sangre en un tubo que contenga EDTA. - Retire el plasma rico en plaquetas centrifugando una vez a 220-240 × g. - Lave 2-3 veces en PBS después de la separación por gradiente de densidad. - Retire los grumos de células y/o residuos pasando la suspensión a través de un colador celular de nailon de 70 µm. † Evite el etiquetado no específico trabajando rápidamente y respetando los tiempos de incubación recomendados.
Avisos del producto: Avisos del producto La fuente de todas las proteínas séricas proviene de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en los Estados Unidos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Las partículas BD IMag™ se preparan a partir de partículas magnéticas carboxifuncionalizadas que son fabricadas por Skold Technology y están licenciadas bajo el número de patente de EE. UU. 7,169,618. El uso de estos productos para medir antígenos de activación expresados ​​en subconjuntos de células mononucleares con el fin de monitorear el estado inmunorregulador puede caer bajo una o más reivindicaciones de las siguientes patentes: Patentes de EE. UU. n.º 5,445,939, 5,656,446, 5,843,689; Patente europea n.º 319,543; Patente canadiense n.º 1,296,622; Patente australiana n.º 615,880; y patente japonesa n.º 2.769.156. Ficoll-Paque es una marca registrada de Amersham Biosciences Limited. Consulte los protocolos técnicos en www.bdbiosciences.com/us/s/resources.