BD, 558013, Partículas magnéticas anti-CD11b BD IMag™ - DM

Nombre alternativo: Itgam; Integrina alfa-M; Ly-40; Mac-1a; Mac-1 alfa; CR3A; Cadena alfa CR-3
Reactividad: Ratón (prueba de control de calidad), humano (probado en desarrollo)
Isotipo: DA de rata, también conocido como DA/HA IgG2b, κ
Inmunógeno: células esplénicas de ratón
Aplicación: Separación de células (probada rutinariamente)
ID de registro: AB_398649
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo o la estreptavidina se conjugaron con las partículas magnéticas en condiciones óptimas y se eliminó el anticuerpo/estreptavidina no conjugado.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Los leucocitos se marcan con partículas anti-CD11b BD IMag™ - DM según el protocolo de marcaje magnético. Esta suspensión celular marcada se coloca entonces dentro del campo magnético del imán de separación celular BD IMag™ (n.º de cat. 552311). Las células marcadas migran hacia el imán (fracción positiva), dejando las células no marcadas en suspensión para que puedan extraerse (fracción negativa). A continuación, se retira el tubo del campo magnético para la resuspensión de la fracción positiva. La separación se repite dos veces para aumentar la pureza de la fracción positiva. Los pasos de la separación magnética se diagraman en el diagrama de flujo de separación. Después de lavar la fracción positiva, el pequeño tamaño de las partículas magnéticas permite que la fracción positiva se evalúe más a fondo en aplicaciones posteriores, como la citometría de flujo. PROTOCOLO DE MARCAJE MAGNÉTICO 1. Prepare una suspensión de células individuales del tejido linfoide de interés según los procedimientos de laboratorio estándar. Elimine los grumos de células o residuos pasando la suspensión a través de un filtro de nailon de 70 µm. 2. Diluya el tampón BD IMag™ (10X) (n.° de cat. 552362) 1:10 con agua destilada estéril o prepare el tampón BD IMag™ 1X complementando la solución salina tamponada con fosfato con 0,5 % de BSA, 2 mM de EDTA y 0,09 % de azida sódica. Colóquelo en hielo. En nuestra experiencia, el anticuerpo monoclonal anti-CD16/CD32 de ratón purificado Mouse BD Fc Block™ 2.4G2 (n.º de cat. 553141/553142) no es necesario para una separación celular óptima, pero algunos laboratorios pueden usarlo. Si añade Mouse BD Fc Block™, continúe con el paso 3. Si no lo añade, continúe con el paso 4. 3. Añada Mouse BD Fc Block a 0,25 µg/10e6 células e incube en hielo durante 15 minutos. 4. Lave las células con al menos un volumen igual de tampón BD IMag™ 1X y aspire con cuidado todo el sobrenadante. 5. Agite bien las partículas BD IMag™ anti-CD11b - DM y añada 50 µl de partículas por cada 10e7 células totales. 6. MEZCLE COMPLETAMENTE. Refrigerar a 6 °C - 12 °C durante 30 minutos. 7. Lleve el volumen de marcado de partículas BD IMag a 1 - 8 x 10e7 células/ml con tampón BD IMag™ 1X y coloque inmediatamente el tubo en el imán de separación celular. Incube a temperatura ambiente durante 6 - 8 minutos. 8. Con el tubo en el imán de separación celular, aspire con cuidado el sobrenadante. Este sobrenadante contiene la fracción negativa. 9. Retire el tubo del imán de separación celular y añada tampón BD IMag™ 1X al mismo volumen que en el paso 7. Resuspenda suavemente las células pipeteando brevemente y devuelva el tubo al imán de separación celular durante otros 2 - 4 minutos. 10. Con el tubo en el imán de separación celular, aspire con cuidado el sobrenadante y deséchelo. 11. Repita los pasos 9 y 10. 12. Tras el último lavado, resuspenda la fracción positiva en un tampón adecuado y a la concentración adecuada para su posterior análisis. NOTA: Evite el etiquetado inespecífico trabajando con rapidez y respetando los tiempos de incubación recomendados.
Avisos del producto: Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Las partículas BD IMag™ se preparan a partir de partículas magnéticas carboxifuncionalizadas, fabricadas por Skold Technology y con licencia de patente estadounidense número 7,169,618. Es posible que la reactividad cruzada detectada durante el desarrollo del producto no se haya confirmado en todos los formatos o aplicaciones.