BD, 558111, BD IMag™ Anti-Ratón Ly-6G y Ly-6C Partículas - DM

Nombre alternativo: Ly6c, antígeno linfocitario 6C2; antígeno linfocitario 6G, Ly6g, Gr-1
Reactividad: Ratón (Prueba de control de calidad)
Isotipo: IgG2b de rata, κ
Inmunógeno: No reportado
Aplicación: Separación de células (probada rutinariamente)
ID de registro: AB_398656
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo o la estreptavidina se conjugaron con las partículas magnéticas en condiciones óptimas y se eliminó el anticuerpo/estreptavidina no conjugado.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Los leucocitos se marcan con partículas anti-ratón Ly-6G y Ly-6C (Gr-1) BD IMag™ - DM de acuerdo con el siguiente protocolo. Esta suspensión celular marcada se coloca entonces dentro del campo magnético del imán de separación celular BD IMag™ (n.º de cat. 552311). Las células marcadas migran hacia el imán (fracción positiva), dejando las células no marcadas en suspensión para que puedan extraerse (fracción negativa). Luego, el tubo se retira del campo magnético para la resuspensión de la fracción positiva. La separación se repite dos veces para aumentar la pureza de la fracción positiva. Los pasos de la separación magnética se diagraman en el diagrama de flujo de separación. Después de lavar la fracción positiva, el pequeño tamaño de las partículas magnéticas permite que la fracción positiva se evalúe más a fondo en aplicaciones posteriores, como la citometría de flujo. PROTOCOLO DE ETIQUETADO MAGNÉTICO 1. Prepare una suspensión de células individuales del tejido linfoide de interés de acuerdo con los procedimientos estándar de laboratorio. Elimine los grumos de células o residuos pasando la suspensión a través de un filtro de nailon de 70 µm. 2. Diluya el tampón BD IMag™ (10X) (n.° de cat. 552362) 1:10 con agua destilada estéril para preparar tampón BD IMag 1X complementando la solución salina tamponada con fosfato con BSA al 0,5 %, EDTA 2 mM y azida sódica al 0,09 %. Coloque en hielo. Aunque nuestra experiencia indica que el mAb 2.4G2 anti-CD16/CD32 de ratón purificado Mouse BD Fc Block™ (n.° de cat. 553141/553142) no es necesario para una separación celular óptima, algunos laboratorios podrían considerarlo en sus estudios. Si agrega Mouse BD Fc Block, continúe con el Paso 3. Si no agrega Mouse BD Fc Block, continúe con el Paso 4. 3. Agregue Mouse BD Fc Block a 0,25 µg/10^6 células e incube en hielo durante 15 minutos. 4. Lave las células con al menos un volumen igual de tampón BD IMag 1X y luego resuspenda el pellet en 90 µl de tampón BD IMag 1X por cada 10^7 células totales. Si usa menos de 10^7 células totales, resuspenda en un volumen de 90 µl. 5. Agite bien las partículas BD IMag™ anti-ratón Ly-6G y Ly-6C (Gr-1) - DM y agregue 10 µl de partículas por cada 10^7 células totales. 6. MEZCLE COMPLETAMENTE. Refrigere a 6 °C - 12 °C durante 15 minutos. 7. Lave las células marcadas con 20 veces el volumen de marcaje de tampón BD IMag 1X, elimine completamente el sobrenadante y resuspenda las células a una concentración adecuada para la columna de separación magnética que se utilizará. 8. Separe las células según el procedimiento recomendado por el fabricante del imán de separación celular BD IMag™. La concentración de partículas anti-ratón Ly-6G y Ly-6C (Gr-1) - DM BD IMag™ sugerida en el protocolo se ha optimizado para la purificación de leucocitos Gr-1 positivos de médula ósea de ratón. Al marcar poblaciones de células diana presentes a frecuencias más bajas, se pueden utilizar menos partículas BD IMag. Por el contrario, al marcar poblaciones de células diana presentes a frecuencias más altas, se deben utilizar más partículas. Para determinar la concentración óptima de partículas antirratón Ly-6G y Ly-6C (Gr-1) - DM BD IMag™ para una aplicación específica, se recomienda una titulación en incrementos de dos veces. Nota: Evite el etiquetado inespecífico trabajando con rapidez y respetando los tiempos de incubación recomendados.
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Las partículas BD IMag™ se preparan a partir de partículas magnéticas carboxifuncionalizadas, fabricadas por Skold Technology y con licencia de patente estadounidense número 7,169,618. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos.