BD, 570002, tampón de tinción de leucocitos BD Pharmingen™ MonoBlock™

Reactividad: Humana (prueba de control de calidad), Ratón (probado en desarrollo)
Aplicación: Citometría de flujo (probada rutinariamente)
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene estabilizador de proteínas y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Preparación y almacenamiento Conservar sin diluir a 4°C.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Para obtener más información sobre el tampón de tinción de leucocitos MonoBlock™, visite nuestro sitio web en: https://www.bdbiosciences.com/monoblock Protocolos para la tinción de superficies inmunofluorescentes multicolor de células utilizando el tampón de tinción de leucocitos BD Pharmingen™ MonoBlock™ Protocolo 1 para la tinción de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) o sangre completa lisada por eritrocitos a granel o muestras de células preparadas a partir de tejidos linfoides. a. Primero, agregue 10 μL de tampón de tinción de leucocitos BD Pharmingen™ MonoBlock™ a cada tubo de tinción o micropocillo de placa seguido de la adición de anticuerpo fluorescente o cócteles de anticuerpos y agite con vórtex cuidadosamente. b. Agregue 100 μL que contengan leucocitos humanos o de ratón suspendidos (p. ej., a ~10^6 células) a cada tubo o micropocillo y agite con vórtex cuidadosamente. Alternativamente: Se pueden añadir primero 10 μL de tampón de tinción de leucocitos BD Pharmingen™ MonoBlock™ y 100 μL de leucocitos suspendidos a cada tubo o micropocillo y agitar cuidadosamente en vórtex. A continuación, añadir el anticuerpo fluorescente o la mezcla de anticuerpos a la mezcla de células y tampón de bloqueo. c. Incube las células suspendidas (30 min) protegidas de la luz a temperatura ambiente (TA) para células humanas y a 4 °C para células de ratón. d. Tras la incubación, lave las células dos veces con tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) [n.º de cat. 554656]. e. Resuspenda las células en 500 μL de tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) para el análisis por citometría de flujo. Protocolo 2 para la tinción de sangre completa humana a. Primero agregue 10 μL de tampón de tinción de leucocitos BD Pharmingen™ MonoBlock™ a cada tubo de tinción seguido de la adición de anticuerpo fluorescente o cócteles de anticuerpos y agite con vórtex cuidadosamente. b. Agregue 100 μL de sangre completa humana. Alternativamente: Primero puede agregar 10 μL de tampón de tinción de leucocitos BD Pharmingen™ MonoBlock™ y 100 μL que contengan sangre completa humana suspendida a cada tubo o micropocillo y agite con vórtex cuidadosamente. Luego agregue anticuerpo fluorescente o cóctel de anticuerpos a la mezcla de células y tampón de bloqueo. c. Incube las células suspendidas (30 min) a temperatura ambiente (TA) protegidas de la luz. d. Después de la incubación, lise los eritrocitos con tampón de lisis BD Pharm Lyse™ (n.º de cat. 555899) o solución de lisis BD FACS™ (n.º de cat. 349202). e. Lave las células dos veces con tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) [n.º de cat. 554656]. f. Resuspenda las células en 500 μl de tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) para el análisis por citometría de flujo. Notas del protocolo: • En el caso de los leucocitos humanos, se puede reducir aún más la posible tinción inespecífica causada por la unión de anticuerpos fluorescentes a los receptores Fc celulares preincubando las células con BD Pharmingen™ Human BD Fc Block™ (n.º de cat. 564219/564220). • En el caso de los leucocitos de ratón, se puede reducir aún más la posible tinción inespecífica causada por la unión de anticuerpos fluorescentes a los receptores Fc celulares preincubando las células con anticuerpo anti-CD16/CD32 de ratón purificado BD Pharmingen™ (BD Fc Block™ de ratón) [cat. El tampón de tinción de leucocitos BD Pharmingen™ MonoBlock™ es compatible con el tampón de tinción brillante BD Horizon™ (n.º de cat. 566349 563749) y el tampón de tinción brillante BD Horizon™ plus (n.º de cat. 566385 568264). Los datos no se muestran, pero están disponibles a solicitud.
Avisos del producto: Avisos del producto Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos. Observe las siguientes precauciones: La absorción de luz visible puede alterar significativamente la transferencia de energía que ocurre en cualquier conjugado de fluorocromo en tándem; por lo tanto, recomendamos tomar precauciones especiales (como envolver viales, tubos o gradillas en papel de aluminio) para evitar la exposición de los reactivos conjugados, incluidas las células teñidas con esos reactivos, a la iluminación ambiental. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Para conocer los espectros de fluorocromo y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. CF™ es una marca registrada de Biotium, Inc. Consulte http://regdocs.bd.com para acceder a las hojas de datos de seguridad (SDS). Cy es una marca registrada de Global Life Sciences Solutions Germany GmbH o una filial que opera bajo el nombre de Cytiva. Para consultar las patentes estadounidenses aplicables, consulte bd.com/patents.