BD, 552933, BD Pharmingen™ PE Ratón Anti-PARP Escindido (Asp214)

Reactividad: Humana (Pruebas de control de calidad)
Isotipo: IgG1 de ratón, κ
Inmunógeno: PARP humana escindida
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Vol. por prueba: 20 µl
ID de registro: AB_647224
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con R-PE en condiciones óptimas y se eliminaron el anticuerpo no conjugado y la PE libre. Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: La camptotecina (un extracto del árbol chino Camptotheca acuminata) es un potente inhibidor de la topoisomerasa I, molécula necesaria para la síntesis de ADN. Se ha demostrado que la camptotecina induce la apoptosis dosis-dependiente in vitro. En BD Biosciences Pharmingen, la camptotecina se utiliza como método general para la inducción de la apoptosis. Materiales: - Solución madre de camptotecina 1,0 µM (Sigma; n.º de cat. C-9911) en DMSO. - Línea celular Jurkat (ATCC TIB-152), proliferante, a 1 x 10^6 células/ml. Kit de fijación/permeabilización Cytofix/Cytoperm™ (n.° de cat. 554714) o solución Cytofix/Cytoperm™ (n.° de cat. 554722) más tampón Perm/Wash™ (n.° de cat. 554723). Procedimiento: 1. Añadir camptotecina (concentración final de 4-6 mM) por cada 1 x 10^6 células Jurkat en proliferación. Si se desea, preparar también una alícuota de control de células sin tratar. 2. Incubar las células durante 4 horas a 37 °C. 3. Lavar las células (las alícuotas tratadas con camptotecina y las de control) dos veces con PBS frío; a continuación, resuspenderlas en solución Cytofix/Cytoperm™ a una concentración de 2 x 10^6 células/ml. 4. Incubar las células durante 20 minutos en hielo. 5. Sedimente las células, aspire y deseche la solución Cytofix/Cytoperm™. 6. Lave las células dos veces a temperatura ambiente con 0,5 ml de tampón Perm/Wash™ por cada 10^6 células y deseche el sobrenadante. 7. Resuspenda las células en tampón Perm/Wash™ a una concentración de 10 x 10^6 /ml. 8. Divida en alícuotas muestras de prueba de 1 x 10^6 células por cada 100 µl de prueba. 9. Añada 20 µl de anticuerpo por prueba e incube durante 30 minutos a temperatura ambiente. 10. Lave cada prueba en 1,0 ml de tampón Perm/Wash™ y deseche el sobrenadante. 11. Resuspenda cada prueba en 0,5 ml de tampón Perm/Wash™ y analice mediante citometría de flujo.
Avisos del producto: Este reactivo ha sido prediluido para su uso al volumen recomendado por prueba. Normalmente utilizamos 1 × 10^6 células en una muestra experimental de 100 µl (una prueba). Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para obtener los protocolos técnicos. Para obtener información sobre los espectros de fluorocromo y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web sobre citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos.