BD, 553437, BD Pharmingen™ FITC IgM de rata antirratón

Reactividad: Ratón (Prueba de control de calidad)
Isotipo: IgG2a de rata, κ
Inmunógeno: No reportado
Aplicación: Citometría de flujo (probada rutinariamente), tinción intracelular (citometría de flujo) (probada durante el desarrollo)
Concentración: 0,5 mg/ml
ID de registro: AB_394857
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con FITC en condiciones óptimas y se eliminó el FITC no reaccionado. Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la exposición prolongada a la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Procedimiento de ensayo recomendado: Tinción inmunofluorescente de IgM intracitoplasmática/intracelular de ratón: 1. Prepare una suspensión de células individuales y determine el número de células. 2. Suspenda las células a 2×10e7 células/ml en tampón de tinción BD Pharmingen™ (n.º de cat. 554656) [o, como alternativa, prepare un tampón de tinción compuesto por PBS + 2 % FBS + 0,1 % de azida sódica] y transfiera a microplacas de fondo en U en 50 µl/pocillo para tinción inmunofluorescente. 3. Bloquee los receptores Fcγ añadiendo 0,2 µg de BD Fc Block™ (n.º de cat. 553141) en 50 µl de tampón de tinción a cada pocillo. 4. Incube 5 minutos en hielo. 5. Añada 200 µl de tampón de tinción por pocillo y resuspenda las células. Centrifugue a 250 × g durante 5 minutos y aspire el sobrenadante. 6. Bloquee la IgM de superficie celular con IgM de rata antirratón purificada (clon II/41) (n.º de cat. 553435) añadiendo 1,0 µg por muestra en 50 µl de tampón de tinción por pocillo. Nota: Los marcadores de superficie pueden teñirse durante este paso, como se describe en la sección "Tinción inmunofluorescente de leucocitos de ratón y rata para citometría de flujo" de la sección "Protocolos técnicos" de nuestro sitio web: http://www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/Mouse_and_Rat_Leukocytes.shtml. 7. Incube 15 minutos en hielo. 8. Lave dos veces como se describe en el paso 5. 9. Resuspenda las células en 100 µl de solución BD Cytofix/Cytoperm™ (n.° de cat. 554714) por pocillo. 10. Incube 30 minutos a temperatura ambiente. 11. Lave dos veces con 200 µl de tampón BD Perm/Wash™ 1× (n.° de cat. 554714) por pocillo. Centrifugue a 250 × g durante 5 minutos y aspire el sobrenadante entre lavados. 12. Teñir para IgM intracelular añadiendo ≤ 1 µg de anticuerpo FITC anti-IgM de ratón (clon II/41) en 50 µl de tampón BD Perm/Wash™ 1× por pocillo. Nota: Durante este paso, se pueden añadir otros anticuerpos recomendados para la tinción de marcadores intracelulares, como se describe en el Paso 12. 13. Incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente. 14. Lavar 2 veces como se describe en el Paso 11. 15. Resuspender y transferir las muestras en 100 µl de tampón de tinción a tubos adecuados para su análisis con un citómetro de flujo. Ajustar el volumen de cada tubo a 400 µl con tampón de tinción. 16. Analizar las muestras en un citómetro de flujo.
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías.