BD, 553443, BD Pharmingen™ FITC IgG1 de rata antirratón

Nombre alternativo: Ighg1; Inmunoglobulina pesada constante gamma 1; Igh-4
Reactividad: Ratón (Prueba de control de calidad)
Isotipo: LOU de rata, también conocida como Louvain, LOU/C, LOU/M IgG1, κ
Inmunógeno: IgG1 de ratón agrupada
Aplicación: Citometría de flujo (probada rutinariamente), tinción intracelular (citometría de flujo) (probada durante el desarrollo)
Concentración: 0,5 mg/ml
ID de registro: AB_394862
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene estabilizador de proteínas y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con FITC en condiciones óptimas y se eliminó el FITC no reaccionado.
Procedimientos de ensayo recomendados: El anticuerpo IgG1 de rata antirratón FITC de BD Pharmingen™ puede usarse como reactivo primario o secundario en la tinción inmunofluorescente. PROTOCOLO DE TINCIÓN INMUNOFLUORESCENTE DE INMUNOGLOBULINA (Ig) INTRACELULAR 1. Prepare una suspensión de células individuales y determine el número de células. 2. Suspenda las células en tampón de tinción (PBS + 2 % FBS + 0,1 % azida sódica) a 2 x 10^7 células/ml y transfiéralas a microplacas de fondo en U a 50 µl/pocillo para la tinción inmunofluorescente. Nota: El tampón de tinción con FBS de BD Pharmingen™ (n.º de cat. 554656) es eficaz como tampón de tinción en este protocolo. 3. Bloquee los receptores Fcγ añadiendo 0,2 µg de anticuerpo antirratón CD16/CD32 purificado de rata (Mouse BD Fc Block™) (n.º de cat. 553141/553142) en 50 µl de tampón de tinción a cada pocillo. 4. Incube 5 minutos en hielo. 5. Añada 200 µl de tampón de tinción por pocillo y resuspenda las células. Centrifugue a 250 xg durante 5 minutos y aspire el sobrenadante. 6. Bloquee la Ig de superficie con anticuerpo antirratón IgG1 purificado de rata (n.º de cat. 553440) añadiendo 1,0 µg por muestra en 50 µl de tampón de tinción por pocillo. Nota: Los marcadores de superficie pueden teñirse durante este paso, como se describe en "Tinción inmunofluorescente de leucocitos de ratón y rata para citometría de flujo" en la sección "Protocolos" de nuestro sitio web, en "Flujo multicolor", en http://www.bdbiosciences.com/us/s/resources. 7. Incubar durante 15 minutos en hielo. 8. Lavar dos veces como se describe en el paso 5. 9. Resuspender las células en 100 µl de tampón de tinción intracelular BD Cytofix/Cytoperm™ (kit BD Cytofix/Cytoperm™, n.º de cat. 554714) por pocillo. 10. Incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente. 11. Lavar dos veces con 200 µl de tampón de perfusión/lavado 1x (incluido en el kit BD Cytofix/Cytoperm) por pocillo. Centrifugue a 250 xg durante 5 minutos y aspire el sobrenadante entre lavados. 12. Tiña la Ig intracelular añadiendo ≤1 µg de BD Pharmingen™ FITC Rat Anti-Mouse IgG1 (n.º de cat. 553443/562026) en 50 µl de 1 x tampón de perfusión/lavado/pocillo. Nota: Se pueden añadir otros anticuerpos recomendados para la tinción de marcadores intracelulares durante este paso, como se describe en el paso 12. 13. Incube durante 30 minutos a temperatura ambiente. 14. Lave 2 veces como se describe en el paso 11. 15. Resuspenda y transfiera las muestras en 100 µl de tampón de tinción a tubos adecuados para el análisis con un citómetro de flujo. Lleve el volumen de cada tubo a 400 µl con tampón de tinción. 16. Analice las muestras en un citómetro de flujo.
Avisos del producto: Se debe utilizar un control de isotipo a la misma concentración que el anticuerpo de interés. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Para obtener información sobre los espectros de fluorocromos y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de Citometría de Flujo Multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos. Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos.