BD, 554179, BD Pharmingen™ Anticiclina B1 de ratón purificada

Reactividad: Humana (prueba de control de calidad), Ratón (reportada)
Isotipo: IgG2a de ratón
Inmunógeno: Ciclina B1 humana recombinante
Aplicación: Western blot (probado rutinariamente), bioimagen (probado durante el desarrollo), citometría de flujo, inmunoprecipitación (reportada)
Peso molecular objetivo: 62 kDa
Concentración: 0,5 mg/ml
ID de registro: AB_395290
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad.
Procedimientos de ensayo recomendados: Bioimagen 1. Siembre las células en un medio de cultivo adecuado a unas 10 000 células por pocillo en una placa de imágenes BD Falcon™ de 96 pocillos (n.º de cat. 353219) y cultive durante la noche. 2. Retire el medio de cultivo de los pocillos y fije las células añadiendo 100 μl de tampón de fijación BD Cytofix™ (n.º de cat. 554655) a cada pocillo. Incube durante 10 minutos a temperatura ambiente (TA). 3. Retire el fijador de los pocillos y permeabilice las células utilizando tampón de permeación BD III, metanol al 90 % o Triton™ X-100: a. Añadir 100 μl de metanol al 90 % a -20 °C o Perm Buffer III (n.º de cat. 558050) a cada pocillo e incubar durante 5 minutos a temperatura ambiente. O b. Añadir 100 μl de Triton™ X-100 al 0,1 % a cada pocillo e incubar durante 5 minutos a temperatura ambiente. 4. Retirar el tampón de permeabilización y lavar los pocillos dos veces con 100 μl de PBS 1×. 5. Retirar el PBS y bloquear las células añadiendo 100 μl de BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) (n.º de cat. 554656) a cada pocillo. Incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente. 6. Retire el tampón de bloqueo y añada 50 μl del anticuerpo primario con titulación óptima (diluido en tampón de tinción) a cada pocillo. Incube durante 1 hora a temperatura ambiente. 7. Retire el anticuerpo primario y lave los pocillos tres veces con 100 μl de PBS 1×. 8. Retire el PBS y añada el reactivo del segundo paso a su concentración óptimamente titulada en 50 μl a cada pocillo. Incube en oscuridad durante 1 hora a temperatura ambiente. 9. Retire el reactivo del segundo paso y lave los pocillos tres veces con 100 μl de PBS 1×. 10. Retire el PBS y realice una contratinción de los núcleos añadiendo 200 μl por pocillo de 2 μg/ml de Hoechst 33342 (p. ej., Sigma-Aldrich, n.º de cat. B2261) en PBS 1× a cada pocillo al menos 15 minutos antes de la adquisición de la imagen. 11. Observe y analice las células en un instrumento de imagen adecuado. Bioimagen: Para obtener más información, consulte http://www.bdbiosciences.com/support/resources/protocols/ceritifed_reagents.jsp. Western blot: Para obtener más información, consulte http://www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/Western_Blotting.shtml.
Avisos del producto: Debido a que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos. Este anticuerpo ha sido desarrollado y certificado para aplicaciones de bioimagen. Sin embargo, no se realiza una prueba de bioimagen de rutina en todos los lotes. Se recomienda a los investigadores titular el reactivo para obtener un rendimiento óptimo. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Triton es una marca registrada de Dow Chemical Company.