BD, 554652, Células de control positivo de citocina de ratón MiCK-1 de BD Pharmingen™

Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Concentración: 5x10^6 células/ml
ID de registro: AB_2869002
Tampón de almacenamiento: congelado en FBS y DMSO al 10%.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Almacene el producto a -80 °C antes de usarlo o para el almacenamiento a largo plazo de soluciones madre. Descongele y centrifugue rápidamente el producto antes de usarlo. Evite congelar y descongelar repetidamente el producto. Esta preparación no contiene conservantes, por lo que debe manipularse en condiciones asépticas. Al recibirla, almacene la suspensión celular a -80 °C. Alternativamente, la suspensión celular congelada puede descongelarse y el vial tapado debe centrifugarse rápidamente para asegurar la recuperación completa de su contenido. Después de resuspender completamente las células con una pipeta, las alícuotas de un solo uso pueden volver a congelarse y almacenarse (-80 °C) en microtubos de polipropileno para un momento posterior.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Las suspensiones celulares de control positivo MiCK-1 están destinadas a proporcionar células que contienen acumulaciones intracelulares de IL-2, TNF e IFN-γ que son detectables por tinción de citocinas intracelulares inmunofluorescentes y citometría de flujo. Como tal, estas células sirven como controles positivos para verificar la actividad de los anticuerpos anticitocinas fluorescentes y el propio procedimiento de tinción (p. ej., permeabilización). Para la tinción, la preparación celular congelada primero debe descongelarse rápida y cuidadosamente. Luego, se pueden transferir alícuotas de la suspensión celular a micropocillos o tubos. Las células fijadas y no permeabilizadas deben lavarse dos veces con tampón de tinción para eliminar el dimetilsulfóxido. Se recomienda teñir primero las células lavadas con un conjugado fluorescente de RM4-5 (p. ej., n.º de cat. 553046, n.º de cat. 553049, n.º de cat. 553050 o n.º de cat. 553051), un anticuerpo que se une a las moléculas CD4 expresadas en la superficie de las células T CD4+ de ratón fijadas. A continuación, las células deben incubarse durante 10 minutos en tampón de permeabilización/lavado y lavarse. Las células se tiñen entonces con un conjugado fluorescente de JES6-5H4 (anticuerpo de rata anti-IL-2 de ratón; n.º de cat. 554427, n.º de cat. 554428 o n.º de cat. 554429), MP6-XT22 (anti-TNF de rata de ratón; n.º de cat. 554418, n.º de cat. 554419 o n.º de cat. 554420) o XMG1.2 (anti-IFN-γ de rata de ratón; n.º de cat. 554411, n.º de cat. 554412 o n.º de cat. 554413). Nota: La tinción de células MiCK-1 con anticuerpos específicos para citocinas se puede demostrar mediante la preincubación del anticuerpo específico para citocinas conjugado con citocina recombinante o mediante el pretratamiento de las células MiCK-1 con un anticuerpo bloqueante no marcado. El porcentaje de células individuales positivas para citocinas que se muestra es representativo del producto. Debido al procedimiento de activación celular, una pequeña proporción de células pueden teñirse de manera no específica (es decir, no bloquearse ni con el anticuerpo no marcado ni con el ligando).
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Evite el contacto con la piel y los ojos. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos.