BD, 557908, Cóctel de anticuerpos activadores de linfocitos T de ratón BD Pharmingen™, con control de isotipo PE-Cy™7 CD25, PE CD69 y APC CD3e

Reactividad: Ratón (Prueba de control de calidad)
Aplicación: Citometría de flujo (probada rutinariamente)
Estado regulatorio: RUO
ID de registro: AB_396932
Descripción: Descripción El cóctel de anticuerpos de activación de linfocitos T de ratón es un reactivo de tres colores diseñado para identificar linfocitos T activados mediante tinción inmunofluorescente directa con análisis de citometría de flujo. Este cóctel consta de la siguiente mezcla de anticuerpos: PE-Cy7 rata anti-CD25 de ratón (clon PC61), PE hámster anti-CD69 de ratón (clon H1.2F3) y APC hámster anti-CD3e de ratón (clon 145-2C11). El anticuerpo PC61 reacciona con CD25, la cadena a del receptor de IL-2 de baja afinidad (IL-2Rα, p55) expresada en linfocitos T y B activados de todas las cepas de ratón analizadas. CD25 también se encuentra en algunas células B en desarrollo en la médula ósea, células T de desarrollo temprano en el timo, células T reguladoras CD4+ periféricas (Treg) y células dendríticas. El anticuerpo H1.2F3 reacciona con CD69 (antígeno de activación muy temprana). Su expresión se induce rápidamente tras la activación de linfocitos (células T, B, NK y NK-T), neutrófilos y macrófagos. El CD69 también se expresa en timocitos sometidos a selección positiva. El anticuerpo 145-2C11 reacciona con la echaína de 25 kDa del complejo CD3 asociado al receptor de células T, que se expresa en timocitos, linfocitos T maduros y células NK-T de todas las cepas de ratón analizadas. Los tres anticuerpos se han titulado y prediluido, mezclado y formulado para un rendimiento de tinción óptimo. El control de isotipo de activación de linfocitos T de ratón contiene concentraciones equivalentes de inmunoglobulinas de control negativo coincidentes con fluorocromo e isotipo. El uso de tres fluorocromos diferentes para el marcaje de los tres anticuerpos diferentes permite el reconocimiento de cada uno de los tres antígenos en cada célula de una muestra. La expresión de los tres antígenos identifica a los linfocitos T activados. Se pueden combinar reactivos adicionales marcados con fluorocromos con el cóctel de anticuerpos de activación de linfocitos T de ratón y el control de isotipo de activación de linfocitos T de ratón para caracterizar mejor las subpoblaciones de linfocitos T activados. El control de isotipo de activación de linfocitos T de ratón contiene concentraciones equivalentes de inmunoglobulina de control negativo con fluorocromo e isotipo coincidente, compuesta por: IgG1 de rata PE-Cy™7, λ (clon A110-1), IgG1 de hámster armenio PE, λ (clon G235-2356) e IgG1 de hámster armenio APC, κ (clon A19-3).
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con R-PE en condiciones óptimas y se eliminaron el anticuerpo no conjugado y la PE libre. El anticuerpo se conjugó con PE-Cy7 en condiciones óptimas y se eliminaron el anticuerpo no conjugado y la PE-Cy7 libre. El anticuerpo se conjugó con APC en condiciones óptimas y se eliminaron el anticuerpo no conjugado y la APC libre.
Avisos del producto: Avisos del producto Este reactivo ha sido prediluido para su uso en el volumen recomendado por prueba. Normalmente usamos 1 × 10^6 células en una muestra experimental de 100 µl (una prueba). Se debe usar un control de isotipo a la misma concentración que el anticuerpo de interés. La fuente de todas las proteínas séricas proviene de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en los Estados Unidos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Para conocer los espectros de fluorocromos y los ajustes adecuados del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Observe las siguientes precauciones: La absorción de luz visible puede alterar significativamente la transferencia de energía que ocurre en cualquier conjugado de fluorocromo en tándem; por lo tanto, recomendamos tomar precauciones especiales (como envolver viales, tubos o gradillas en papel de aluminio) para evitar la exposición de los reactivos conjugados, incluidas las células teñidas con dichos reactivos, a la iluminación ambiental. PE-Cy7 es un fluorocromo en tándem compuesto de R-ficoeritrina (PE), que se excita con luz de 488 nm y sirve como donante de energía, acoplado al colorante de cianina Cy7, que actúa como aceptor de energía y fluoresce máximamente a 780 nm. La emisión del fluorocromo en tándem PE-Cy7 se recoge en un detector para longitudes de onda de fluorescencia de 750 nm y superiores. Aunque se hace todo lo posible para minimizar la variación entre lotes en la eficiencia de la transferencia de energía del fluorocromo, se pueden observar diferencias en la emisión residual de PE. Por lo tanto, recomendamos realizar controles de compensación individuales para cada conjugado PE-Cy7. PE-Cy7 está optimizado para su uso con un único láser de iones de argón que emite luz de 488 nm, y no existe una superposición significativa entre los espectros de emisión de PE-Cy7 y FITC. Al utilizar citómetros de doble láser, que pueden excitar directamente tanto PE como Cy7, recomendamos utilizar la compensación de haz cruzado durante la adquisición de datos o la compensación por software durante el análisis de datos. Este reactivo conjugado con APC puede utilizarse en cualquier citómetro de flujo equipado con un láser de colorante, HeNe o diodo rojo. Advertencia: Algunos conjugados de APC-Cy7 y PE-Cy7 muestran cambios en su espectro de emisión con la exposición prolongada al formaldehído. Si no puede analizar las muestras fijadas en un plazo de cuatro horas, le recomendamos utilizar el fijador estabilizador BD™ (n.º de cat. 338036). Cy es una marca registrada de GE Healthcare. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos.
Descripción: Cantidad/Tamaño: Número de pieza: ID de EntrezGene
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