BD, 557916, Cóctel de anticuerpos activadores de linfocitos T de ratón BD Pharmingen™, con control de isotipo

Reactividad: Ratón (Prueba de control de calidad)
Aplicación: Citometría de flujo (probada rutinariamente)
Estado regulatorio: RUO
ID de registro: AB_396937
Descripción: El cóctel de anticuerpos para la activación de linfocitos T de ratón es un reactivo tricolor diseñado para identificar los principales subgrupos de linfocitos T mediante tinción inmunofluorescente directa mediante citometría de flujo. Este cóctel consta de la siguiente mezcla de anticuerpos: PE-Cy™7 de rata anti-CD25 de ratón (clon PC61), PE-Cy™7 de hámster armenio anti-CD69 de ratón (clon H1.2F3) y FITC de hámster armenio anti-CD3ε de ratón (clon 145-2C11). PE-Cy™7 de rata anti-CD25 de ratón (clon PC61) reacciona con CD25, la cadena α del receptor de IL-2 de baja afinidad (IL-2Rα, p55) expresada en linfocitos T y B de ratón activados. El CD25 también se encuentra en algunas células B en desarrollo en la médula ósea, células T en desarrollo temprano en el timo, células T reguladoras CD4+ periféricas (Treg) y células dendríticas. El CD69 antirratón de hámster PE (clon H1.2F3) reacciona con el CD69, también conocido como el antígeno de activación muy temprana. Su expresión se induce rápidamente tras la activación de linfocitos (células T, B, NK y NK-T), neutrófilos y macrófagos. También se ha informado que el CD69 se expresa en timocitos que están experimentando selección positiva. El CD3ε antirratón de hámster FITC (clon 145-2C11) reacciona con la cadena ε de 25 kDa del complejo CD3 asociado al receptor de células T, expresado en timocitos, linfocitos T maduros y células NK-T. El control de isotipo de activación de linfocitos T de ratón contiene concentraciones equivalentes de inmunoglobulina de control negativo coincidente con fluorocromo e isotipo que consiste en lo siguiente: IgG1 de rata PE-Cy™7, λ (clon A110-1), IgG1 de hámster armenio PE, λ (clon G235-2356) e IgG1 de hámster armenio FITC, κ (clon A19-3).
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con FITC en condiciones óptimas y se eliminó el FITC no reaccionado. El anticuerpo se conjugó con R-PE en condiciones óptimas y se eliminaron el anticuerpo no conjugado y el PE libre. El anticuerpo se conjugó con PE-Cy7 en condiciones óptimas y se eliminaron el anticuerpo no conjugado y el PE-Cy7 libre.
Procedimientos de ensayo recomendados: Citometría de flujo: Los tres anticuerpos contenidos en el cóctel de anticuerpos de activación de linfocitos T de ratón se han titulado, prediluido, mezclado y formulado para un rendimiento de tinción óptimo. El uso de tres fluorocromos diferentes para el marcaje de tres anticuerpos diferentes permite el reconocimiento distintivo de tres antígenos diferentes en cada célula de una muestra. Los niveles de expresión de los tres antígenos distinguen las principales subpoblaciones de linfocitos T en desarrollo y periféricos. Se pueden combinar reactivos adicionales marcados con fluorocromos con el cóctel de anticuerpos de activación de linfocitos T de ratón y el control de isotipo de activación de linfocitos T de ratón para caracterizar mejor las subpoblaciones de células T.
Avisos del producto: Avisos del producto Este reactivo ha sido prediluido para su uso al volumen recomendado por prueba. Normalmente usamos 1 × 10^6 células en una muestra experimental de 100 µl (una prueba). Se debe usar un control de isotipo a la misma concentración que el anticuerpo de interés. La fuente de todas las proteínas séricas proviene de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en los Estados Unidos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Observe las siguientes precauciones: La absorción de luz visible puede alterar significativamente la transferencia de energía que ocurre en cualquier conjugado de fluorocromo en tándem; por lo tanto, recomendamos tomar precauciones especiales (como envolver viales, tubos o gradillas en papel de aluminio) para evitar la exposición de los reactivos conjugados, incluidas las células teñidas con esos reactivos, a la iluminación ambiental. Advertencia: Algunos conjugados APC-Cy7 y PE-Cy7 muestran cambios en su espectro de emisión con la exposición prolongada al formaldehído. Si no puede analizar las muestras fijadas en cuatro horas, le recomendamos utilizar el fijador estabilizador BD™ (n.° de cat. 338036). Para obtener información sobre los espectros de fluorocromos y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Este producto está sujeto a los derechos de propiedad de Amersham Biosciences Corp. y la Universidad Carnegie Mellon, y se fabrica y vende bajo licencia de Amersham Biosciences Corp. Este producto tiene licencia de venta únicamente para investigación. No está autorizado para ningún otro uso. Si necesita una licencia comercial para usar este producto y no la tiene, devuelva este material, sin abrir, a BD Biosciences, 10975 Torreyana Rd, San Diego, CA 92121 y se le reembolsará el importe pagado por el material. PE-Cy7 es un fluorocromo en tándem compuesto por R-ficoeritrina (PE), que se excita con luz de 488 nm y actúa como donante de energía, acoplado al colorante de cianina Cy7, que actúa como aceptor de energía y presenta una fluorescencia máxima de 780 nm. La emisión del fluorocromo en tándem PE-Cy7 se capta en un detector para longitudes de onda de fluorescencia de 750 nm y superiores. Si bien se hace todo lo posible para minimizar la variación entre lotes en la eficiencia de la transferencia de energía del fluorocromo, pueden observarse diferencias en la emisión residual de PE. Por lo tanto, recomendamos realizar controles de compensación individuales para cada conjugado de PE-Cy7. PE-Cy7 está optimizado para su uso con un único láser de iones de argón que emite luz de 488 nm, y no existe una superposición significativa entre los espectros de emisión de PE-Cy7 y FITC. Al utilizar citómetros de doble láser, que pueden excitar directamente tanto el PE como el Cy7, recomendamos usar la compensación de haz cruzado durante la adquisición de datos o la compensación por software durante el análisis de datos. Cy es una marca registrada de GE Healthcare. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos.
Descripción: Cantidad/Tamaño: Número de pieza: ID de EntrezGene
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