BD, 558064, Cóctel de anticuerpos activadores de linfocitos B de ratón BD Pharmingen™, con control de isotipo; PE-Cy™7 CD25, PE CD69 y FITC CD19

Reactividad: Ratón (Prueba de control de calidad)
Aplicación: Citometría de flujo (probada rutinariamente)
Estado regulatorio: RUO
ID de registro: AB_397011
Descripción: Descripción El cóctel de anticuerpos de activación de linfocitos B de ratón es un reactivo de tres colores diseñado para identificar los principales subconjuntos de linfocitos B mediante tinción inmunofluorescente directa con análisis de citometría de flujo. El anticuerpo PC61 reacciona con CD25, la cadena α del receptor de IL-2 de baja afinidad (IL-2Rα, p55) expresada en linfocitos T y B activados de todas las cepas de ratón analizadas. El CD25 también se encuentra en algunas células B en desarrollo en la médula ósea, células T de desarrollo temprano en el timo, células T reguladoras CD4+ periféricas (Treg) y células dendríticas. El anticuerpo H1.2F3 reacciona con CD69 (antígeno de activación muy temprana). Su expresión se induce rápidamente tras la activación de linfocitos (células T, B, NK y NK-T), neutrófilos y macrófagos. El CD69 también se expresa en timocitos que están experimentando selección positiva. El anticuerpo 1D3 reacciona con CD19, un antígeno de diferenciación del linfocitos B que se expresa durante todo el desarrollo de los linfocitos B, desde la fase pro-B hasta la fase madura de los mismos. Las células plasmáticas terminalmente diferenciadas no expresan CD19. Los tres anticuerpos se han titulado, prediluido, mezclado y formulado para una tinción óptima. El control de isotipo de activación de linfocitos B de ratón contiene concentraciones equivalentes de inmunoglobulina de control negativo con fluorocromo e isotipo coincidentes. El uso de tres fluorocromos diferentes para el marcaje de los tres anticuerpos permite el reconocimiento de cada uno de los tres antígenos en cada célula de la muestra. Los niveles de expresión de los tres antígenos distinguen las principales subpoblaciones de linfocitos B en desarrollo y periféricos. Se pueden combinar reactivos adicionales marcados con fluorocromo con el cóctel de anticuerpos de activación de linfocitos B de ratón y el control de isotipo de activación de linfocitos B de ratón para caracterizar mejor las subpoblaciones de linfocitos B.
Preparación y almacenamiento: El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con PE-Cy7 en condiciones óptimas, eliminándose el anticuerpo no conjugado y el PE-Cy7 libre. El anticuerpo se conjugó con R-PE en condiciones óptimas, eliminándose el anticuerpo no conjugado y el PE libre. El anticuerpo se conjugó con FITC en condiciones óptimas, eliminándose el FITC no reaccionado. Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar.
Avisos del producto: Avisos del producto Este reactivo ha sido prediluido para su uso al volumen recomendado por prueba. Normalmente usamos 1 × 10^6 células en una muestra experimental de 100 µl (una prueba). Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos. Para los espectros de fluorocromo y los ajustes adecuados del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. PE-Cy7 es un fluorocromo en tándem compuesto de R-ficoeritrina (PE), que se excita con luz de 488 nm y sirve como donante de energía, acoplado al colorante de cianina Cy7, que actúa como aceptor de energía y fluoresce máximamente a 780 nm. La emisión del fluorocromo en tándem PE-Cy7 se recoge en un detector para longitudes de onda de fluorescencia de 750 nm y superiores. Aunque se hace todo lo posible para minimizar la variación entre lotes en la eficiencia de la transferencia de energía del fluorocromo, pueden observarse diferencias en la emisión residual de PE. Por lo tanto, recomendamos realizar controles de compensación individuales para cada conjugado PE-Cy7. PE-Cy7 está optimizado para su uso con un único láser de iones de argón que emite luz de 488 nm, y no existe una superposición significativa entre los espectros de emisión de PE-Cy7 y FITC. Al utilizar citómetros de doble láser, que pueden excitar directamente tanto PE como Cy7, recomendamos el uso de compensación de haz cruzado durante la adquisición de datos o compensación de software durante el análisis de datos. Tenga en cuenta las siguientes precauciones: La absorción de luz visible puede alterar significativamente la transferencia de energía que se produce en cualquier conjugado de fluorocromo en tándem; por lo tanto, recomendamos tomar precauciones especiales (como envolver viales, tubos o gradillas en papel de aluminio) para evitar la exposición de los reactivos conjugados, incluidas las células teñidas con dichos reactivos, a la iluminación ambiental. Cy es una marca registrada de Amersham Biosciences Limited. Este producto conjugado se vende bajo licencia de las siguientes patentes: Patentes de EE. UU. n.° 5.486.616; 5.569.587; 5.569.766; 5.627.027. Advertencia: Algunos conjugados de APC-Cy7 y PE-Cy7 muestran cambios en su espectro de emisión con la exposición prolongada al formaldehído. Si no puede analizar las muestras fijadas en un plazo de cuatro horas, le recomendamos que utilice el fijador estabilizador BD™ (n.° de cat. 338036). Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Este producto está sujeto a los derechos de propiedad de Amersham Biosciences Corp. y la Universidad Carnegie Mellon, y se fabrica y vende bajo licencia de Amersham Biosciences Corp. Este producto tiene licencia de venta únicamente para investigación. No está autorizado para ningún otro uso. Si necesita una licencia comercial para usar este producto y no la tiene, devuelva este material sin abrir a BD Biosciences, 10975 Torreyana Rd, San Diego, CA 92121, y se le reembolsará el importe pagado por el material.
Descripción: Cantidad/Tamaño: Número de pieza: ID de EntrezGene
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