BD, 558576, BD Pharmingen™ FITC Ratón anti-PARP escindido (Asp214)

Nombre alternativo: Asp214
Reactividad: Humana (prueba de control de calidad), Ratón (probado en desarrollo)
Isotipo: IgG1 de ratón, κ
Inmunógeno: PARP humana escindida
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Vol. por prueba: 20 µl
ID de registro: AB_647179
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con FITC en condiciones óptimas y se eliminó el FITC no reaccionado.
Procedimientos de ensayo recomendados: La camptotecina (un extracto del árbol chino Camptotheca acuminata) es un potente inhibidor de la topoisomerasa I, una molécula necesaria para la síntesis de ADN. Se ha demostrado que la camptotecina induce la apoptosis de forma dependiente de la dosis in vitro. La camptotecina se utiliza en BD Biosciences Pharmingen como método general para inducir la apoptosis. Materiales: • Solución madre de camptotecina 1,0 mM (Sigma; n.º de cat. C-9911) en DMSO. • Línea celular Jurkat (ATCC TIB-152), proliferante, a ~1 x 10^6 células/ml. • Kit de fijación/permeabilización BD Cytofix/Cytoperm™ (n.° de cat. 554714) o solución BD Cytofix/Cytoperm™ (n.° de cat. 554722) más tampón BD Perm/Wash™ (n.° de cat. 554723). Procedimiento: 1. Añadir camptotecina (concentración final de 4-6 μM) por cada 10^6 células Jurkat en proliferación. Si se desea, también se puede preparar una alícuota de control de células sin tratar. 2. Incubar las células durante 4-6 horas a 37 °C. 3. Lavar las células (las alícuotas tratadas con camptotecina y las de control) dos veces con PBS frío; a continuación, resuspenderlas en solución BD Cytofix/Cytoperm™ a una concentración de 2 x 10^6 células/ml. 4. Incubar las células durante 20 minutos en hielo. 5. Sedimente las células y aspire y deseche la solución BD Cytofix/Cytoperm™. 6. Lave las células dos veces a temperatura ambiente con 0,5 ml de tampón BD Perm/Wash™ por cada 1 x 10^6 células, centrifugue y deseche el sobrenadante. 7. Resuspenda las células en tampón BD Perm/Wash™ a 10 x 10^6 /ml. 8. Divida en alícuotas las muestras de prueba de 1 x 10^6 células por cada 100 μl de prueba. 9. Añada 20 μl de anticuerpo por prueba e incube durante 30 minutos a temperatura ambiente, protegida de la luz. 10. Lave cada prueba en 1,0 ml de tampón BD Perm/Wash™, centrifugue y deseche el sobrenadante. 11. Resuspenda cada prueba en 0,5 ml de tampón BD Perm/Wash™ y analice mediante citometría de flujo.
Avisos del producto: Este reactivo ha sido prediluido para su uso al volumen recomendado por prueba. Normalmente utilizamos 1 × 10^6 células en una muestra experimental de 100 µl (una prueba). Para obtener información sobre los espectros de fluorocromo y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos.