BD, 558615, BD Pharmingen™ Alexa Fluor® 647 Anti-Ki-67 de ratón

Nombre alternativo: MKI67; Antígeno identificado por el anticuerpo monoclonal Ki-67; KIA
Reactividad: Humana (prueba de control de calidad), Ratón (probado en desarrollo), Rata, Rhesus (reportado)
Isotipo: IgG1 de ratón, κ
Inmunógeno: Ki-67 humano
Aplicación: Bioimagen (probada rutinariamente), tinción intracelular (citometría de flujo) (probada durante el desarrollo)
Vol. por prueba: 5 µl
ID de registro: AB_647130
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con Alexa Fluor® 647 en condiciones óptimas y se eliminó el Alexa Fluor® 647 que no reaccionó.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados 1. Siembre las células en un medio de cultivo adecuado a ~10 000 células por pocillo en una placa de imágenes de 96 pocillos y cultive durante la noche. 2. Retire el medio de cultivo de los pocillos y fije las células añadiendo 100 µl de formaldehído fresco al 3,7 % en PBS o tampón de fijación BD Cytofix™ (n.º de cat. 554655) a cada pocillo e incubándolo durante 10 minutos a temperatura ambiente (TA). 3. Retire el fijador de los pocillos y permeabilice las células utilizando metanol frío o Triton™ X-100: a. Añada 100 µl de metanol al 90 % a -20 °C o tampón de permeación BD™ Phosflow III a -20 °C (n.º de cat. 558050) a cada pocillo e incube durante 5 minutos a TA. O b. Añada 100 µl de Triton™ X-100 al 0,1 % a cada pocillo e incube durante 5 minutos a temperatura ambiente. 4. Retire el permeabilizador y lave los pocillos dos veces con 100 µl de PBS 1×. 5. Retire el PBS y bloquee las células añadiendo 100 µl de tampón de bloqueo (FBS al 3 % en PBS 1×) o tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) (n.º de cat. 554656) a cada pocillo e incube durante 30 minutos a temperatura ambiente. 6. Retire el tampón de bloqueo, diluya el conjugado de anticuerpo 1:10 en tampón de bloqueo o tampón de tinción (FBS) y tiña las células añadiendo 50 µl del conjugado de anticuerpo diluido a cada pocillo e incube durante 1 hora a temperatura ambiente. 7. Retire el conjugado de anticuerpo diluido y lave los pocillos tres veces con 100 μl de PBS 1×. 8. Retire el PBS y realice una contratinción de los núcleos añadiendo 100 μl de una solución de 2 μg/ml de Hoechst 33342 (p. ej., Sigma-Aldrich Cat. N.° B2261) en PBS 1× a cada pocillo al menos 15 minutos antes de la adquisición de imágenes. 9. Observe y analice las células en un instrumento de adquisición de imágenes adecuado.
Avisos del producto: Avisos del producto Este reactivo ha sido prediluido para su uso al volumen recomendado por prueba cuando se sigue el procedimiento de ensayo recomendado. Una prueba es típicamente ~10,000 células cultivadas en un pocillo de una placa de imágenes de 96 pocillos. Se debe usar un control de isotipo a la misma concentración que el anticuerpo de interés. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. La fuente de todas las proteínas séricas proviene de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en los Estados Unidos. La reactividad cruzada de especies detectada en el desarrollo del producto puede no haber sido confirmada en todos los formatos y/o aplicaciones. Alexa Fluor® es una marca registrada de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR. Los conjugados de anticuerpos de los colorantes Alexa Fluor®, Pacific Blue™ y Cascade Blue® presentes en este producto se venden bajo licencia de Molecular Probes, Inc. exclusivamente para uso en investigación, excluyendo su uso en combinación con microarrays o como reactivos específicos para analitos. Los colorantes Alexa Fluor® (excepto Alexa Fluor® 430), Pacific Blue™ y Cascade Blue® están protegidos por patentes en trámite y emitidas. Para obtener información sobre los espectros de fluorocromos y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. La emisión del fluorocromo Alexa Fluor® 647 se obtiene con la misma configuración del instrumento que para la aloficocianina (APC). Triton es una marca registrada de Dow Chemical Company. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos.