BD, 560098, Conjunto de tampón FoxP3 humano BD Pharmingen™

Estado regulatorio: RUO
ID de registro: AB_2869302
Descripción: El kit de tampón FoxP3 humano (n.° de cat. 560098) está optimizado para su uso con el anticuerpo monoclonal FoxP3 clon 259D/C7. Está diseñado para la fijación y permeabilización de PBMC o sangre completa lisada para la tinción intracelular de FoxP3 humano y la tinción superficial de marcadores de CD adecuados.
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Preparación de tampones antes del uso (las soluciones de trabajo para los tampones A y C de FoxP3 humano deben prepararse nuevas para cada conjunto experimental) 1. Diluya el tampón A de FoxP3 (concentrado 10X) 1:10 con agua desionizada a temperatura ambiente (20 °C a 25 °C). 2. Para preparar una solución de trabajo de tampón C, diluya el tampón B de FoxP3 (50X) en tampón A de FoxP3 1X en una proporción de 1:50 (tampón B:tampón A). Procedimiento de preparación y tinción celular para el anticuerpo anti-FoxP3 humano purificado 1. Deje los tampones a temperatura ambiente antes de usarlos. Prepare las soluciones de trabajo del conjunto de tampones de FoxP3 humano (n.º de cat. 560098) como se describe en la sección anterior (Preparación de tampones antes del uso). 2. Prepare PBMC humanas. Calcule las células necesarias por prueba. Se recomienda aproximadamente 1,2 X 10^6 PBMC por prueba. 3. Fije las células a granel o en tamaño de prueba, use 2 mL de solución de trabajo 1X Human FoxP3 Buffer A por prueba, incube durante 10 minutos a TA, protegido de la luz. Nota: Las PBMC fijadas a granel se pueden congelar a -80 °C durante un máximo de 24 horas antes de continuar con el paso 4. 4. Lave las células con 2 mL de BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS)* por prueba. Centrifugue a 500 xg durante 10 minutos y retire el tampón de lavado. 5. Para permeabilizar las células a granel o en tamaño de prueba, agregue 0,5 ml de solución de trabajo 1X Human FoxP3 Buffer C por prueba, incube durante 30 minutos, protegido de la luz. 6. Agregue 2 mL adicionales de Stain Buffer (FBS)* por prueba. Centrifugue a 500 xg durante 10 minutos y retire el tampón de lavado. 7. Resuspenda las células en tampón de tinción (FBS)* a ~1 x 10^7 células/mL, alícuotando 100 µL de suspensión celular por tubo de 12 x 75 mm. 8. Añada el mAb anti-FoxP3 humano purificado a concentraciones adecuadas de 20 µl/prueba a los tubos. Agite suavemente o agite en vórtex. Incube durante 30 minutos a temperatura ambiente, protegido de la luz. 9. Lave las células dos veces añadiendo 2 mL de tampón de tinción (FBS)* a cada tubo y centrifugue a 500 xg durante 5 minutos a temperatura ambiente. Retire el tampón de lavado. 10. Añada el anticuerpo secundario (APC Rat Anti-Mouse IgG1, n.° de cat. 550874) a la concentración adecuada. Incube durante 30 minutos a temperatura ambiente, protegido de la luz. 11. Repita el lavado como en el paso. 9. 12. Bloquee el secundario con suero de ratón normal 1:10 en PBS 1 X, 100 µL por prueba. Incube durante 10 minutos a TA. 13. Agregue volúmenes de prueba de mAb de superficie antihumanos, incube durante 20 minutos a temperatura ambiente, protegido de la luz. 14. Agregue 2 mL de tampón de tinción (FBS)* a cada tubo y centrifugue 500 xg durante 5 minutos a temperatura ambiente y retire el tampón de lavado. 15. Resuspenda en tampón de lavado y analice inmediatamente. Adquiera al menos 15,000 a 25,000 linfocitos CD4 positivos. Opcional: Agregue 300 µl de formaldehído al 1% en PBS 1X y almacene a 4 °C. Analice las células dentro de las 24 horas. Preparación celular y procedimiento de tinción para el anticuerpo anti-FoxP3 humano conjugado 1. Deje los tampones a temperatura ambiente antes de usarlos. Prepare las soluciones de trabajo del juego de tampones Human FoxP3 (n.º de cat. 560098) como se describe en la sección anterior (Preparación de los tampones antes del uso). 2. Prepare las PBMC humanas. Diluya las células con tampón de tinción (FBS) BD Pharmingen™ (n.º de cat. 554656) a 1 x 10^7 células/ml. 3. Pipetee la cantidad adecuada de reactivo de tinción de superficies en el fondo de cada tubo de 12 x 75 mm. 4. Añada 100 µl de células por tubo, agite en vórtex e incube durante 20 minutos a temperatura ambiente, protegido de la luz. 5. Añada 2 ml de tampón de tinción (FBS)* al lavado. Centrifugue a 250 xg durante 10 minutos y retire el tampón de lavado. 6. Para fijar las células, resuspenda suavemente el sedimento en el volumen residual del tampón de lavado y, a continuación, añada 2 ml de tampón Human FoxP3 1x A. Agite en vórtex. Incubar durante 10 minutos a temperatura ambiente, protegido de la luz. 7. Centrifugar a 500 xg durante 5 minutos y retirar el fijador. Precaución: el pellet flota. 8. Para lavar las células, resuspender cada pellet en 2 ml de tampón de tinción (FBS)* y centrifugar a 500 xg durante 5 minutos. Retirar el tampón de lavado. 9. Para permeabilizar las células, resuspender con cuidado el pellet en el volumen residual del tampón de lavado y añadir 0,5 ml de solución de trabajo 1X Human FoxP3 Buffer C a cada tubo. Agitar en vórtex. Incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente, protegido de la luz. 10. Para lavar las células, añadir 2 ml de tampón de tinción BD Pharmingen (FBS)* a cada tubo, centrifugar a 500 xg durante 5 minutos a temperatura ambiente. Retirar el tampón y repetir el paso de lavado. Retirar el tampón. 11. Añada el anticuerpo FoxP3 conjugado a la concentración adecuada para resuspender el pellet. Agite suavemente o agite en vórtex. 12. Incube durante 30 minutos en oscuridad a temperatura ambiente. 13. Repita el lavado como en el paso 10. 14. Resuspenda en el tampón de lavado y analice inmediatamente. Adquiera al menos de 15 000 a 25 000 linfocitos CD4 positivos. Opcionalmente, añada 300 µL de formaldehído al 1 % en PBS 1x y almacene a 4 °C. Analice las células en un plazo de 24 horas. * Se recomienda utilizar el tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) (n.º de cat. 554656) para la tinción inicial de la superficie y todos los pasos de lavado, cubriendo los tubos con tapas o papel Parafilm durante la incubación. También se recomienda optimizar los voltajes de dispersión frontal y lateral para visualizar los linfocitos separados de los desechos, los fantasmas de glóbulos rojos o las plaquetas antes de la adquisición. Advertencias y precauciones: Peligro: El tampón FoxP3 humano A (10X) (componente 51-9005451) contiene 31,05 % de dietilenglicol (p/p), 10,08 % de formaldehído (p/p) y 3,54 % de metanol (p/p). Indicaciones de peligro: Nocivo en caso de ingestión. Nocivo para la vida acuática. Tóxico en contacto con la piel o si se inhala. Provoca irritación cutánea. Puede provocar una reacción alérgica en la piel. Provoca lesiones oculares graves. Se sospecha que provoca defectos genéticos. Puede provocar cáncer. Vía de exposición: Inhalatorio. Puede provocar daños en los órganos. Puede provocar irritación respiratoria. Puede provocar daños en los riñones tras una exposición prolongada o repetida. Vía de exposición: Oral. Declaraciones de precaución: Llevar ropa/protección facial. Llevar guantes de protección. EN CASO DE INGESTIÓN: Enjuagar la boca. NO provocar el vómito. Llamar a un CENTRO DE TOXICOLOGÍA/médico si la persona se encuentra mal. EN CASO DE CONTACTO CON LA PIEL (o el pelo): Quitarse inmediatamente toda la ropa contaminada. Enjuagar la piel con agua [o ducharse]. Lavar la ropa contaminada antes de volver a usarla. Llamar inmediatamente a un CENTRO DE TOXICOLOGÍA/médico. Si se produce irritación cutánea: Consultar a un médico. EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Aclarar cuidadosamente con agua durante varios minutos. Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta fácil. Seguir aclarando. EN CASO DE INHALACIÓN: Transportar a la víctima al exterior y mantenerla en reposo en una posición confortable para respirar. EN CASO DE exposición o sospecha: Consultar a un médico. Guardar bajo llave. Eliminar el contenido/el recipiente en una instalación de tratamiento y eliminación adecuada de acuerdo con las leyes y normativas aplicables, y las características del producto en el momento de la eliminación. Human FoxP3 Buffer B (componente 51-9005450) contiene ≤ 0,09 % de azida sódica.
Avisos del producto: Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Consulte los protocolos técnicos en www.bdbiosciences.com/us/s/resources.
Descripción: Cantidad/Tamaño: Número de pieza: ID de EntrezGene
N/D : 100.0 : N/D : N/D