BD, 560409, Juego de tampones Foxp3 para ratón BD Pharmingen™

Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Estado regulatorio: RUO
ID de registro: AB_2869340
Descripción: El set de tampón Foxp3 de ratón BD Pharmingen™ está optimizado para su uso con el anticuerpo monoclonal Foxp3 clon MF23. Está diseñado para la fijación y permeabilización de linfocitos de ratón para la tinción intracelular de Foxp3 de ratón y la tinción superficial de los marcadores CD adecuados.
Preparación y almacenamiento: Preparación y almacenamiento Conservar sin diluir a 4°C.
Procedimientos de ensayo recomendados: Concentrado de fijación de Foxp3 de ratón (20x) (componente 51-9006124): 10 ml. Conservar a 4 °C y proteger de la exposición prolongada a la luz. Esta es una solución madre 20× que debe diluirse antes de usar con PBS 1× normal sin FBS. Preparación del tampón de fijación 1×: Diluir 1 parte de concentrado de fijación con 19 partes de PBS 1×. Preparar 2 ml para cada prueba (1x10^6 células). Poner en hielo. No conservar el tampón de fijación 1×, preparar uno nuevo cada vez. Concentrado de permeabilización de Foxp3 de ratón (5x) (componente 51-9006125): 80 ml. Conservar a 4 °C. Esta es una solución madre 5× que debe diluirse antes de usar con PBS 1× normal sin FBS. Preparación de tampón de permeabilización 1 ×: Diluya 1 parte de concentrado de permeabilización con 4 partes de PBS 1 ×. Prepare 4 ml para cada prueba (1 x 10^6 células). Precaliente a 37 °C antes de usar. No guarde el tampón de permeabilización 1 ×; prepárelo fresco cada vez. Preparación celular y procedimientos de tinción para anticuerpos anti-Foxp3 de ratón conjugados: 1. Prepare una suspensión celular del tejido linfoide periférico de interés. Elimine los grumos de células o residuos pasando la suspensión a través de un filtro de células de nailon Falcon® de 70 µm (Corning, n.° de cat. 352235). Utilice tampón de lisis BD PharmLyse™ 1 × (n.° de cat. 555899) para lisar los eritrocitos si es necesario. Diluir las células con tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS, n.º de cat. 554656) hasta 10 millones de células/ml. 2. Pipetear la cantidad adecuada de CD4 u otro reactivo de tinción de superficie en el fondo de cada tubo de 12 x 75 mm. 3. Añadir 100 µL de células por tubo y mezclar bien. Incubar durante 20 minutos a temperatura ambiente en oscuridad. 4. Para lavar las células, añadir 2 mL de tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) a cada tubo. Centrifugar a 250 xg durante 10 minutos y retirar el tampón. 5. Para fijar las células, resuspender suavemente el sedimento en el volumen residual del tampón de tinción y añadir 2 ml de tampón de fijación BD Pharmingen™ Mouse Foxp3 1× frío recién preparado. Mezclar bien. Incubar durante 30 minutos a 4 °C en oscuridad. 6. Centrifugue a 500 xg durante 5 minutos y retire el fijador. 7. Para lavar las células, resuspenda cada pellet en 2 ml de tampón de permeabilización BD Pharmingen™ Mouse Foxp3 1× recién preparado y precalentado, y centrifugue a 500 xg durante 5 minutos. Retire el tampón de permeabilización. 8. Para permeabilizar las células, resuspenda suavemente el pellet en otros 2 ml de tampón de permeabilización BD Pharmingen™ Mouse Foxp3 1× recién preparado y precalentado. Incube durante 30 minutos a 37 °C en la oscuridad. 9. Centrifugue a 500 xg durante 5 minutos y retire el tampón. 10. Para lavar las células, añada 2 ml de tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) a cada tubo, centrifugue a 500 xg durante 5 minutos. Retire el tampón. 11. Añada 20 µL de anticuerpo Foxp3 conjugado diluido con tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) a la concentración adecuada (consulte la leyenda de la figura de cada formato para conocer la concentración) para resuspender el pellet. Agite suavemente o agite brevemente en vórtex. 12. Incube durante 20 minutos a temperatura ambiente en oscuridad. 13. Repita el paso de lavado n.° 10 dos veces. 14. Resuspenda las células en 0,5 mL de tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) y analice inmediatamente. Adquiera al menos entre 15 000 y 25 000 linfocitos CD4 positivos. Nota: Se recomienda el tampón de tinción BD Pharmingen™ para todos los pasos de lavado y cubrir los tubos con tapas o parafilm durante la incubación. También se recomienda optimizar los voltajes de dispersión frontal y lateral para visualizar los linfocitos separados de los desechos, glóbulos rojos, etc. antes de la adquisición. Peligro: El concentrado de fijación Foxp3 de ratón (20x) (componente 51-9006124) contiene 4,2 % de formaldehído (p/p). Indicaciones de peligro Nocivo si se inhala. Provoca irritación cutánea. Provoca lesiones oculares graves. Puede provocar una reacción alérgica en la piel. Se sospecha que provoca defectos genéticos. Puede provocar cáncer. Vía de exposición: Inhalatorio. Puede causar irritación respiratoria. Consejos de precaución Llevar ropa protectora / protección ocular. Llevar guantes protectores. No respirar la niebla/los vapores/el aerosol. EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Aclarar cuidadosamente con agua durante varios minutos. Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta fácil. Seguir aclarando. En caso de irritación o sarpullido en la piel: Consultar a un médico.
Avisos del producto: Avisos del producto Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos.
Descripción: Cantidad/Tamaño: Número de pieza: ID de EntrezGene
N/D : 100.0 : N/D : N/D