BD, 565802, tinción de ácido nucleico verde BD Via-Probe™

Aplicación: Citometría de flujo, Inmunocitoquímica, Inmunofluorescencia, Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado durante el desarrollo)
Concentración: 5 mM
ID de registro: AB_2869716
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar a -20 °C, protegido de la luz. Evitar congelaciones y descongelaciones repetidas del producto.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Nota: Este colorante de ácido nucleico se ha desarrollado para aplicaciones de citometría de flujo (intracelular) y microscopía de inmunofluorescencia. Caracterizado químicamente para consistencia, los investigadores deben determinar la concentración óptima de este reactivo para aplicaciones individuales. Tinción de células vivas para análisis de viabilidad por citometría de flujo 1. Obtenga una suspensión de células individuales. 2. Resuspenda las células a 1-2 × 10^6 células/mL en BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) (Cat. No. 554656) o 1× DPBS que contenga 5-20 nM BD Via-Probe™ Green. a. La concentración óptima de BD Via-Probe™ Green para análisis de viabilidad puede variar según el tipo de célula. El uso de altas concentraciones puede provocar que el colorante entre en células viables. Por lo tanto, recomendamos titular el reactivo para su tipo de célula de interés en experimentos preliminares. b. Además, las células apoptóticas pueden teñirse con cantidades variables de sonda. Recomendamos la co-tinción con una sonda para células apoptóticas, p. ej., BD Horizon™ BV421 Annexin V (Cat. No. 563973), si se desea un análisis más profundo de las células apoptóticas. 3. Incubar las células y teñirlas durante 5 minutos a temperatura ambiente protegidas de la luz. No son necesarios más lavados celulares antes del análisis. 4. Proceder al análisis por citometría de flujo. Tinción de células fijadas para análisis de contenido de ADN por citometría de flujo 1. Obtener una suspensión de células individuales. 2. Tratar las células en hielo durante 30 minutos con etanol helado al 70-80%. a. La fijación con etanol generalmente proporciona los histogramas de ADN más resueltos. Sin embargo, este reactivo también se ha utilizado con éxito para el análisis de contenido de ADN con el protocolo BD Pharmingen™ Transcription Factor Buffer Set (Cat. No. 562574/562725). 3. Lave las células una vez con tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS). 4. Resuspenda las células a 1-2 × 10^6 células/ml en BD Via-Probe™ Green 0,1-1 μM en presencia de 0,1-0,5 mg/ml de ARNasa sin ADNasa (p. ej., Sigma Aldrich, n.º de cat. D6513) diluida en tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) o 1× DPBS inmediatamente antes de usar. a. La densidad celular y la concentración óptimas de BD Via-Probe™ Green para el análisis del contenido de ADN pueden variar según el tipo celular. Las condiciones del ensayo deben optimizarse en experimentos preliminares para obtener los mejores resultados. 5. Incube las células durante 5-15 minutos. No es necesario realizar más lavados celulares antes del análisis. 6. Proceda al análisis por citometría de flujo. Las muestras deben procesarse a un caudal bajo para obtener los mejores resultados. Las velocidades de flujo altas pueden resultar en un mayor % CV para cada compartimento del ciclo celular en el histograma de ADN. Tinción inmunofluorescente de células fijadas para visualización nuclear. 1. Fije y permeabilice las células según se desee. 2. Diluya la solución BD Via-Probe™ Green a 0,1-1 μM en DPBS 1× con 0,1-0,5 mg/mL de ARNasa sin DNasa (p. ej., Sigma Aldrich, n.º de cat. D6513) inmediatamente antes de su uso. 3. Añada la solución BD Via-Probe™ Green a cada muestra al menos 15 minutos antes del análisis. 4. Proceda a la microscopía de fluorescencia y al análisis de imágenes.
Avisos del producto: Consulte los protocolos técnicos en www.bdbiosciences.com/us/s/resources. Triton es una marca registrada de Dow Chemical Company. FlowJo es una marca registrada de Tree Star Inc. Alexa Fluor® es una marca registrada de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR.