BD, 560259, BD Pharmingen™ Anti-Mouse Nanog purificado

Reactividad: Ratón (Prueba de control de calidad)
Isotipo: Ratón BALB/c IgG1, κ
Inmunógeno: proteína recombinante Nanog de ratón
Aplicación: Bioimagen, Western blot (probado rutinariamente)
Peso molecular objetivo: 42 kDa
Concentración: 0,5 mg/ml
ID de registro: AB_1645261
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad.
Procedimientos de ensayo recomendados: Para obtener más información sobre las aplicaciones de Western Blot y Bioimagen, consulte la sección "Recursos de aplicación" en nuestro sitio web: www.bdbiosciences.com/us/s/resources. Protocolo recomendado para Bioimagen: 1. Sembrar las células en un medio de cultivo adecuado, con la densidad celular adecuada, en una placa de imágenes de 96 pocillos y cultivar durante toda la noche a 48 horas. 2. Retirar el medio de cultivo de los pocillos y lavar (1-2 veces) con 100 μl de PBS 1×. 3. Fijar las células añadiendo 100 µl de formaldehído fresco al 3,7 % en PBS o tampón de fijación BD Cytofix™ (n.º de cat. 554655) a cada pocillo e incubar durante 10 minutos a temperatura ambiente (TA). 4. Retire el fijador de los pocillos y lávelos (1-2 veces) con 100 μl de PBS 1×. 5. Permeabilice las células usando metanol frío (a), Triton™ X-100 (b) o saponina (c): a. Añada 100 µl de metanol al 90 % a -20 °C o tampón de permeación BD™ Phosflow III a -20 °C (n.º de cat. 558050) a cada pocillo e incube durante 5 minutos a temperatura ambiente. b. Añada 100 µl de Triton™ X-100 al 0,1 % a cada pocillo e incube durante 5 minutos a temperatura ambiente. c. Añada 100 µl de tampón de permeación/lavado 1× (n.º de cat. 554723) a cada pocillo e incube durante 15 a 30 minutos a temperatura ambiente. Continúe usando el tampón de permeabilización/lavado 1× para todos los pasos de lavado y dilución posteriores. 6. Retire el tampón de permeabilización de los pocillos y lave 1 o 2 veces con 100 μl del tampón adecuado (ya sea 1× PBS o 1× tampón de permeabilización/lavado, consulte el paso 5c). 7. Paso de bloqueo opcional: Retire los tampones de lavado y bloquee las células añadiendo 100 µl de tampón de bloqueo BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) (n.º de cat. 554656) o FBS al 3 % en el tampón de dilución adecuado a cada pocillo e incubando durante 15 a 30 minutos a temperatura ambiente. 8. Diluya el anticuerpo a su concentración de trabajo óptima en el tampón de dilución adecuado. Titule los anticuerpos purificados (no conjugados) y los reactivos del segundo paso para determinar la concentración óptima. Si utiliza un conjugado de anticuerpos certificado por Bioimaging, dilúyalo 1:10. 9. Añada 50 µl de anticuerpo diluido por pocillo e incube durante 60 minutos a temperatura ambiente. Si utiliza anticuerpos marcados con fluorescencia, incube en oscuridad. 10. Retire el anticuerpo y lave los pocillos tres veces con 100 µl de tampón de lavado. Opcionalmente, puede añadir un lavado con detergente (100 µl de Tween al 0,05 % en PBS 1×) antes de los pasos de lavado habituales. 11. Si el anticuerpo utilizado está marcado con fluorescencia, continúe con el paso 12. De lo contrario, si utiliza un anticuerpo purificado sin marcar, repita los pasos 8 a 10 con un reactivo de segundo paso marcado con fluorescencia para detectar el anticuerpo purificado. 12. Después del lavado final, contrateñir los núcleos añadiendo 100 μl de una solución de 2 μg/ml de Hoechst 33342 (p. ej., Sigma-Aldrich Cat. No. B2261) en PBS 1× a cada pocillo al menos 15 minutos antes de la obtención de imágenes. 13. Visualizar y analizar las células en un instrumento de obtención de imágenes adecuado.
Avisos del producto: Avisos del producto. Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Se debe utilizar un control de isotipo a la misma concentración que el anticuerpo de interés. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Para obtener espectros de fluorocromo y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Triton es una marca registrada de Dow Chemical Company. Consulte http://regdocs.bd.com para acceder a las hojas de datos de seguridad (SDS). La azida sódica es un inhibidor reversible del metabolismo oxidativo; por lo tanto, las preparaciones de anticuerpos que contienen este agente conservante no deben utilizarse en cultivos celulares ni inyectarse en animales. La azida sódica puede eliminarse lavando las células teñidas o el anticuerpo unido a la placa o dializando el anticuerpo soluble en un tampón sin azida sódica. Dado que la endotoxina también puede afectar los resultados de los estudios funcionales, recomendamos el formato de anticuerpo NA/LE (sin azida/bajo endotoxina), si está disponible, para uso in vitro e in vivo. Alexa Fluor® es una marca registrada de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos.