BD, 553413, BD Pharmingen™ Anti-IgE de rata purificada de ratón

Nombre alternativo: Igh-7; cadena pesada de inmunoglobulina 7 (cadena pesada de IgE)
Reactividad: Ratón (Prueba de control de calidad)
Isotipo: LOU de rata, también conocida como Louvain, LOU/C, LOU/M IgG1, κ
Inmunógeno: IgE de ratón (agrupada)
Aplicación: Captura ELISA (Probada rutinariamente)
Concentración: 0,5 mg/ml
ID de registro: AB_394846
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados ELISA sándwich: Se puede usar IgE antirratón de rata purificada (clon R35-72) a ~2 µg/ml como anticuerpo de captura acoplado con IgE antirratón de rata con biotina (n.º de cat. 553419) como anticuerpo de detección. Se recomienda encarecidamente a los investigadores titular cada reactivo en un rango de concentraciones (p. ej., 1-8 µg/ml) para obtener resultados óptimos. Se puede usar el control de isotipo κ de IgE de ratón purificado (n.º de cat. 557079, 553481 o 557080) como estándar de ELISA. Alternativamente, se ofrece el juego de ELISA para IgE de ratón BD OptEIA™ (n.º de cat. 555248) como un práctico producto de ELISA sándwich que es fácil de usar y puede usarse para la cuantificación de IgE de ratón soluble. Protocolo I de ELISA de IgE de ratón. Recubrimiento con anticuerpo de captura: 1. Diluya el anticuerpo de captura de IgE de rata antirratón purificado (clon R35-72) (n.º de cat. 553413) a ~ 2 µg/ml en tampón de recubrimiento. Añada 100 µl por pocillo a una placa de grado ELISA de unión a proteínas mejorada. Se anima a los investigadores a determinar la concentración óptima de anticuerpo para su uso. Se sugieren titulaciones entre 1 y 8 µg/ml. 2. Agite la placa para asegurarse de que todos los pocillos estén cubiertos por la solución de anticuerpo de captura. 3. Cubra la placa e incube durante 1 hora a 37 °C o durante la noche a 4 °C. 4. Lave la placa 3 veces con PBS/Tween. Para cada lavado, los pocillos se llenan con 200 µl de PBS/Tween y se dejan reposar al menos 1 minuto antes de aspirar o vaciar. Como paso final, golpee la placa sobre toallas de papel para eliminar el exceso de tampón. II. Bloqueo: 1. Bloquee la placa con 200 µl de tampón de bloqueo por pocillo. 2. Cubra la placa e incube a temperatura ambiente durante 30 minutos. 3. Lave la placa 3 veces con PBS/Tween, como se describe en la sección I, paso 4. III. Aplique estándares y muestras: 1. Deje la columna 1 de la placa como pocillos en blanco (es decir, sin antígeno añadido a 100 µl por pocillo que consiste únicamente en tampón de bloqueo). Use las columnas 2 y 3 para duplicados del estándar a 100 µl por pocillo. Diluya el estándar de IgE de ratón purificada (n.º de cat. 557079, 553481 o 557080) en tampón de bloqueo. Las diluciones deben variar en una serie de 8 diluciones dobles, en tampón de bloqueo, comenzando en 0,5 µg/ml. Use las columnas restantes para agregar muestras de interés a varias diluciones en tampón de bloqueo a 100 µl por pocillo. 2. Cubra la placa e incube durante al menos 1 hora a temperatura ambiente o durante la noche a 4 °C. 3. Lave la placa tres veces con PBS/Tween, como se indica en la sección I, paso 4. IV. Incubación con anticuerpo de detección: 1. Diluya la IgE de rata antirratón con biotina (n.° de cat. 553419) a ~2 µg/ml en tampón de bloqueo. Añada 100 µl por pocillo. Se recomienda a los investigadores determinar la concentración óptima de anticuerpos para su uso. Se recomiendan titulaciones entre 1 y 8 µg/ml. 2. Cubra la placa e incube a temperatura ambiente durante 1 hora. 3. Lave la placa 6X con PBS/Tween, como en la sección I, paso 4. V. Agregue avidina o estreptavidina-peroxidasa de rábano picante (Av-HRP o SAv-HRP): 1. Diluya estreptavidina HRP (n.º de cat. 554066) como se recomienda para el producto (p. ej., 1:1000) en tampón de bloqueo. Agregue 100 µl por pocillo. 2. Cubra la placa e incube a temperatura ambiente durante 30 minutos. 3. Lave la placa 6X con PBS/Tween, como en la sección I, paso 4. VI. Agregue el sustrato y desarrolle: 1. Descongele el tampón de sustrato (ABTS) dentro de los 20 minutos posteriores a su uso. Agregue 11 µl de H2O2 al 30 % (Sigma-Aldrich, n.º de cat. H1009) a 11 ml de tampón de sustrato y agite en vórtex. Añada inmediatamente 100 µl por pocillo y deje que se desarrolle a temperatura ambiente durante 20-30 minutos. La reacción de color puede detenerse añadiendo 50 µl por pocillo de solución SDS/DMF (opcional). 2. Lea la placa a 405 nm.
Avisos del producto: Avisos del producto. Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Se debe utilizar un control de isotipo a la misma concentración que el anticuerpo de interés. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. La azida sódica es un inhibidor reversible del metabolismo oxidativo; por lo tanto, las preparaciones de anticuerpos que contienen este agente conservante no deben utilizarse en cultivos celulares ni inyectarse en animales. La azida sódica puede eliminarse lavando las células teñidas o el anticuerpo unido a la placa, o dializando el anticuerpo soluble en un tampón sin azida sódica. Dado que la endotoxina también puede afectar los resultados de los estudios funcionales, recomendamos el formato de anticuerpo NA/LE (sin azida/bajo endotoxina), si está disponible, para uso in vitro e in vivo. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos.