BD, 553419, BD Pharmingen™ Biotina IgE de rata antirratón

Reactividad: Ratón (Prueba de control de calidad)
Isotipo: LOU de rata, también conocida como Louvain, LOU/C, LOU/M IgG1, κ
Inmunógeno: IgE de ratón agrupada
Aplicación: Detección ELISA (probada rutinariamente)
Concentración: 0,5 mg/ml
ID de registro: AB_394850
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene estabilizador de proteínas y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con biotina en condiciones óptimas y se eliminó la biotina no reaccionada. Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la exposición prolongada a la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados ELISA: Para la detección de IgE de ratón mediante ELISA tipo sándwich, este anticuerpo puede utilizarse como anticuerpo de detección a una concentración de ~2 µg/ml, junto con el anticuerpo anti-IgE de ratón purificado de rata (clon R35-72) (n.º de cat. 553413) como anticuerpo de captura. La IgE de ratón purificada (n.º de cat. 557079, 553481 o 557080) puede utilizarse como estándar de ELISA. Como alternativa, el kit BD OptEIA™ para ELISA de IgE de ratón (n.º de cat. 555248) se ofrece como un práctico producto de ELISA tipo sándwich, fácil de usar, que permite la cuantificación de IgE de ratón soluble. Protocolo I de ELISA de IgE de ratón. Recubrimiento con anticuerpo de captura: 1. Diluya el anticuerpo de captura de IgE de rata antirratón purificado (clon R35-72) (n.º de cat. 553413) a ~ 2 µg/ml en tampón de recubrimiento. Añada 100 µl por pocillo a una placa de ELISA de unión a proteínas mejorada (p. ej., BD Falcon™ n.º de cat. 353279). Se recomienda a los investigadores que determinen la concentración óptima de anticuerpos para su uso. Se sugieren titulaciones entre 1 y 8 µg/ml. 2. Agite la placa para asegurar que todos los pocillos estén cubiertos por la solución de anticuerpo de captura. 3. Cubra la placa e incube durante 1 hora a 37 °C o durante la noche a 4 °C. 4. Lave la placa 3 veces con PBS/Tween. Para cada lavado, los pocillos se llenan con 200 µl de PBS/Tween y se dejan reposar al menos 1 minuto antes de aspirar o vaciar. Como paso final, golpee la placa sobre toallas de papel para eliminar el exceso de tampón. II. Bloqueo: 1. Bloquee la placa con 200 µl de tampón de bloqueo por pocillo. 2. Cubra la placa e incube a temperatura ambiente durante 30 minutos. 3. Lave la placa 3 veces con PBS/Tween, como se describe en la sección I, paso 4. III. Aplique los estándares y las muestras: 1. Deje la columna 1 de la placa como pocillos en blanco (es decir, sin antígeno añadido a 100 µl por pocillo que consiste solo en tampón de bloqueo). Use las columnas 2 y 3 para duplicados del estándar a 100 µl por pocillo. Diluya el estándar de IgE de ratón purificada (n.º de cat. 557079, 553481 o 557080) en tampón de bloqueo. Las diluciones deben variar en una serie de 8 diluciones dobles, en tampón de bloqueo, comenzando en 0,5 µg/ml. Use las columnas restantes para agregar muestras de interés en varias diluciones en tampón de bloqueo a 100 µl por pocillo. 2. Cubra la placa e incube durante al menos 1 hora a temperatura ambiente o durante la noche a 4 °C. 3. Lave la placa 3X con PBS/Tween, como en la sección I, paso 4. IV. Incubación con anticuerpo de detección: 1. Diluya el anticuerpo de rata anti-IgE de ratón biotinilado (clon R35-118) (N.º de cat. 553419) a ~ 2 µg/ml en tampón de bloqueo. Agregue 100 µl por pocillo. Se anima a los investigadores a determinar la concentración óptima de anticuerpo para su uso. Se sugieren titulaciones entre 1-8 µg/ml. 2. Cubra la placa e incube a temperatura ambiente durante 1 hora. 3. Lave la placa 6X con PBS/Tween, como en la sección I, paso 4. V. Agregue avidina o estreptavidina-peroxidasa de rábano picante (Av-HRP o SAv-HRP): 1. Diluya Av-HRP (N.º de cat. 554058) o SAv-HRP (N.º de cat. 554066) como se recomienda para el producto (p. ej., 1:1000) en tampón de bloqueo. Agregue 100 µl por pocillo. 2. Cubra la placa e incube a temperatura ambiente durante 30 minutos. 3. Lave la placa 6X con PBS/Tween, como en la sección I, paso 4. VI. Agregue el sustrato y desarrolle: 1. Descongele el tampón de sustrato (ABTS) dentro de los 20 minutos posteriores a su uso. Añadir 11 µl de H₂O₂ al 30 % (Sigma-Aldrich, n.º de cat. H1009) a 11 ml de tampón de sustrato y agitar en vórtex. Añadir inmediatamente 100 µl por pocillo y dejar desarrollar a temperatura ambiente durante 20-30 minutos. La reacción de color puede detenerse añadiendo 50 µl por pocillo de solución SDS/DMF (opcional). 2. Leer la placa a 405 nm.
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías.