BD, 554066, BD Pharmingen™ Estreptavidina HRP

Aplicación: ELISA (probado de forma rutinaria)
ID de registro: AB_2868972
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ProClin™ 150 como conservante.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: La estreptavidina se conjugó con la enzima en condiciones óptimas. Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Protocolo general de ELISA tipo sándwich para placas ELISA de 96 pocillos La estreptavidina HRP es un reactivo útil de segundo paso para marcar un anticuerpo primario biotinilado para su detección por ELISA (con un sistema de sustrato adecuado). Se recomienda a los investigadores titular este reactivo, con una dilución inicial sugerida de 1:1000. Materiales necesarios: Solución de unión Solución salina tamponada con fosfato (PBS) pH 7,2. Tenga en cuenta que el pH del PBS se puede aumentar o disminuir, o se pueden utilizar otros tampones para obtener una mejor unión de un anticuerpo de captura según lo determinado experimentalmente. PBS/Tween® Añada 0,5 ml de Tween®-20 en 1 L de PBS 1× para obtener una solución al 0,05 % de Tween®-20. Tampón de bloqueo: Prepare suero bovino fetal (FBS) al 10 % o BSA al 1 % (grado de inmunoensayo) en PBS. El tampón de bloqueo debe filtrarse para eliminar partículas antes de su uso. Tampón de bloqueo/Tween®: Prepare suero fetal bovino (SFB) al 10 %, suero bovino recién nacido (NBCS) al 10 % o BSA (grado inmunoensayo) al 1 % en PBS/Tween®. El tampón de bloqueo debe filtrarse para eliminar partículas antes de su uso. Sustratos cromogénicos: Prepare soluciones de sustrato con un sustrato de HRP disponible comercialmente: 1) TMB (3,3',5,5'-tetrametilbencidina) es un sustrato soluble en agua que produce un producto final de color azul al reaccionar con HRP. Su desarrollo de color es más rápido que el de ABTS, un sustrato de HRP alternativo. Se recomienda el uso del set de reactivos de sustrato TMB BD OptEIA™ (n.° de cat. 555214). 2) El ABTS (sal diamónica del ácido 2,2'-azinobis [3-etilbenzotiazolina-6-sulfónico]) es un sustrato hidrosoluble que produce un producto final de color verde al reaccionar con HRP. Su desarrollo de color es más lento que el del TMB, un sustrato alternativo de HRP. Anticuerpo de captura: 1. Diluya el anticuerpo de captura específico del analito purificado a ~1-4 μg/ml en solución de unión. Añada 50 μl de anticuerpo diluido a los pocillos de una placa ELISA de unión a proteínas mejorada. 2. Selle la placa para evitar la evaporación. Incube durante la noche a 4 °C. Bloqueo: 3. Lleve la placa a temperatura ambiente (TA), lave 3 veces con PBS/Tween® y bloquee la unión inespecífica añadiendo 200 μl de tampón de bloqueo por pocillo. 4. Selle la placa e incube a TA durante 1-2 h. 5. Lave ≥ 3 veces con PBS/Tween®. Estándares y muestras: 6. Añada diluciones seriadas del analito estándar y las muestras de prueba diluidas en tampón de bloqueo/Tween® a 100 μl por pocillo. 7. Selle la placa e incúbela durante 2-4 horas a temperatura ambiente o durante la noche a 4 °C. 8. Lave ≥ 4 veces con PBS/Tween®. Anticuerpo de detección: 9. Diluya el anticuerpo de detección biotinilado específico del analito a 0,5-2 μg/ml en tampón de bloqueo/Tween®. Añada 100 μl de anticuerpo diluido a cada pocillo. 10. Selle la placa e incúbela durante 1 hora a temperatura ambiente. 11. Lave ≥ 4 veces con PBS/Tween®. Estreptavidina-Peroxidasa de Rábano Picante (Estreptavidina-HRP): 12. Diluya el conjugado de estreptavidina-HRP (n.° de cat. 554066) hasta su concentración óptima pretitulada en tampón de bloqueo/Tween®. Añada 100 µl por pocillo. 13. Selle la placa e incúbela a temperatura ambiente durante 30 min. 14. Lave ≥ 5 veces con PBS/Tween®. Sustrato cromogénico: 15. Dispense 100 µl de TMB utilizando el juego de reactivos de sustrato TMB BD OptEIA™ (n.° de cat. 555214) o soluciones de sustrato ABTS en cada pocillo. Incube a temperatura ambiente (5-45 min) y controle el desarrollo de color. La reacción de coloración se puede detener añadiendo 50 µl de solución de parada disponible comercialmente por pocillo. 16. Lea la densidad óptica (DO) de cada pocillo con un lector de microplacas. El producto coloreado generado a partir de TMB mediante HRP se lee a 450 nm y, si se dispone de corrección de longitud de onda, se recomienda una lectura de 450-570 nm. El producto coloreado generado a partir de ATBS mediante HRP se lee a 405 nm y, si se dispone de corrección de longitud de onda, se recomienda una lectura de 405-490 nm. 17. La intensidad del producto coloreado es proporcional a la cantidad de analito presente en la muestra de prueba. Utilizando un lector ELISA y un software ELISA, se utilizan gráficos de absorbancia frente a una serie de diluciones de concentraciones de analito estándar para calcular los niveles de analito presentes en las muestras. Advertencia: La estreptavidina HRP contiene 0,004 % (p/p) de una mezcla CMIT/MIT (3:1), que es una mezcla de: 5-cloro-2-metil-4-isotiazolin-3-ona [CE n.º 247-500-7] y 2-metil-4-isotiazolin-3-ona [CE n.º 220-239-6] (3:1). Indicaciones de peligro Puede provocar una reacción alérgica en la piel. Consejos de precaución Llevar guantes y protección ocular. Llevar ropa de protección. Evitar respirar la niebla/los vapores/el aerosol. En caso de irritación o erupción cutánea: Consultar a un médico. EN CASO DE CONTACTO CON LA PIEL: Lavar con abundante agua. Eliminar el contenido/el recipiente de conformidad con la normativa local/regional/nacional/internacional.
Avisos del producto: Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Ingrediente peligroso: ProClin™ 150. Evite la exposición a la piel y los ojos, así como su ingestión. Lave la piel expuesta con agua y jabón. Enjuague los ojos con agua. Consulte http://regdocs.bd.com para acceder a las fichas de datos de seguridad (FDS). ProClin es una marca registrada de Rohm and Haas Company. Para conocer las patentes estadounidenses aplicables, consulte bd.com/patents.