BD, 555053, BD Pharmingen™ Biotina de rata anti-TGF-β1 de ratón, humano y de cerdo

Reactividad: Humana (prueba de control de calidad), ratón, cerdo (probado en desarrollo)
Isotipo: IgG2a de rata, κ
Inmunógeno: TGF-β1 de ratón recombinante
Aplicación: Detección ELISA (probada rutinariamente)
Concentración: 0,5 mg/ml
ID de registro: AB_395674
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con biotina en condiciones óptimas y se eliminó la biotina no reaccionada. Conservar sin diluir a 4 °C.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Detección ELISA: Para un ELISA sándwich para medir los niveles de proteína TGF-β1 de ratón, humano o cerdo, el anticuerpo monoclonal biotinilado anti-TGF-β1 de ratón, humano o cerdo A75-3 (Cat. No. 555053) se puede utilizar como detector junto con el anticuerpo A75-2 purificado (Cat. No. 555052) como anticuerpo de captura y TGF-β1 derivado de humano como estándar. El anticuerpo A75-3 biotinilado debe titularse de 0,5 - 2,0 µg/ml para determinar la concentración óptima para la detección ELISA. Para obtener curvas estándar, se recomienda la duplicación de la dilución del estándar TGF-β1 que varía de ~4000 a 30 pg/ml para su inclusión en cada placa ELISA. Para conocer la metodología específica, consulte el capítulo 7 sobre ELISA en el Manual de Aplicación de Técnicas para el Análisis de la Función Inmunitaria, 1.ª edición, o visite la sección de protocolos de nuestro sitio web, www.bdbiosciences.com. Nota: Este par de reactivos ELISA se recomienda principalmente para la medición de citocinas en cultivos celulares experimentales. Estos reactivos ELISA no se recomiendan para el análisis de muestras de suero o plasma. Para la medición de TGF-β1 humano en suero o plasma, nuestro kit BD OptEIA para TGF-β1 humano (n.º de cat. 559119) está especialmente formulado y se recomienda. Importante: Antes de realizar el análisis ELISA para determinar los niveles de proteína TGF-β1, las muestras de fluidos biológicos deben acidificarse. El protocolo se describe a continuación: Para muestras de suero, primero diluya el suero en PBS en 1:5 (es decir, 20 µl de suero + 80 µl de PBS), luego agregue 1 N HCl 1:25 para ajustar a pH 3 (es decir, 4 µl 1 N HCl a 100 µl de suero diluido). Los sobrenadantes celulares pueden tratarse sin diluir con 1 N HCl 1:25 para ajustar a pH 3 (es decir, 4 µl 1 N HCl a 100 µl de sobrenadante). Incube las muestras acidificadas durante 60 minutos a 4 °C (alternativamente, las muestras pueden tratarse a temperatura ambiente durante 15 minutos). Después de la incubación, neutralice las muestras tratando cada muestra con 1 N NaOH 1:25 y analice inmediatamente o almacene a -70 °C hasta la prueba. Nota: Este par de ELISA no muestra reactividad cruzada con otras citocinas o quimiocinas (p. ej., IL-1α humana, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, GM-CSF, IFN-γ, TNF, LT-α, MCP-1, MCP-2, MIP-1α, MIP-1β, SCF, linfotactina, VEGF, G-CSF, NT-3, PDGF, CD23, IP-10, GRO, NAP-2, PF4). Western blot: El anticuerpo A75-3 purificado es útil para Western blot. Tenga en cuenta que esta aplicación no se prueba de forma rutinaria en BD Biosciences Pharmingen.
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías.